Как сделать пробирку с кровью верлиоки

Добавил пользователь Алексей Ф.
Обновлено: 04.10.2024

Многие начинают бояться тромбов после того, как при сдачи крови из вены медсестра сообщает, что она слишком вязкая. Те же, кто обладает слишком жидкой кровью, успешно наполняющей пробирку, надеются, что застрахованны от тромбоза. Но вязкость и свёртываемость – два совершенно разных понятия, и не всегда одно обуславливает другое.

Какая ты вязкая

Ещё одна частая причина повышенной вязкости – повышенный уровень эритроцитов и гемоглобина, характерный для курильщиков. Ведь чем больше дыма и меньше воздуха человек вдыхает, тем большая концентрация переносчиков кислорода необходима. Формируется их компенсаторное повышение. Поэтому визуально кровь курящих нередко кажется более вязкой.

В норме содержание эритроцитов крови составляет 3,7-5,1, тромбоцитов – 180-320.

Вязкость и свёртываемость – в чём разница?

Наиболее важным показателем является свёртываемость крови. К сожалению, получить точную информацию о свёртываемости, даже, несмотря на уровень развития медицины, бывает непросто. С одной стороны давно известны явные заболевания с нарушением свёртываемости, такие как гемофилия. С другой, немало скрытой патологии, которая может долгое время никак себя не выдавать, но проявившись однажды, быстро привести к тяжёлым последствиям.

Лишь в последние десятилетия исследователи научились выявлять эти проблемы с помощью высокотехнологичных генетических анализов. Учитывая, что по статистике врождённая патология свёртывающей системы крови есть у более 1-3% населения Земли, вполне вероятно, что в будущем эти анализы будут проводить в роддоме каждому новорожденному. И совершено точно тем, кому необходимо назначить те или иные лекарства, способные усилить риск появления тромбов.

Предохранение или опасность?

Что покажет анализ?

Какие же анализы необходимо сдать, чтобы проверить свёртываемость крови? Самый распространённый и многим привычный анализ – коагулограмма может дать ответ далеко не на все вопросы, особенно в профилактике тромбозов.

Тем не менее, классическая коагулограмма – первый этап скринингового обследования системы свёртываемости. Если она выявит отклонения от нормы, следующим шагом станут более детальные исследования гемостаза – тромбоэластография или тромбоэластометрия. Отдельная история – определение D-димера, мутации Лейдена и других генетических нарушений свёртывания - тесты, выявляющие склонность к образованию тромбов в будущем. Что и в каких случаях необходимо?

Самая распространённая сегодня стандартная коагулограмма включает в себя пять компонентов: ПТИ ( протромбиновый индекс); МНО ( Международное нормализованное отношение. Отражает отношение времени свёртываемости крови пациента к времени свёртывания крови здорового пациента; АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время. Оценивает время, за которое образуется сгусток крови после присоединения к плазме специальных реагентов), УРОВЕНЬ ФИБРОГЕНА и ТРОМБОЦИТОВ.

При этом АЧТВ информативен лишь у людей, проходящих лечение гепарином, а МНО важен только для людей, постоянно принимающих разжижающие кровь препараты из группы неодикумаринов (варфарин).

Получается, два показателя из пяти не так важны для скрининга. Общее количество тромбоцитов также не всегда показательно, ведь при большинстве коагулопатий изменяется не их число, а прежде всего функциональная активность.

Поэтому наиболее информативным, позволяющий оценить сразу несколько звеньев свёртывания крови – тромбоэластография. Это своего рода детальное наблюдение за формированием кровяного сгустка, и его последующего растворения (лизиса) с построением графиков каждого из этапов. Тромбоэластометрия – другой вариант этого исследования, считающийся ещё более информативным. К сожалению, приборы для проведения этих исследований дороги и требуют специального обучения персонала, поэтому предложить услуги тромбоэластографии может далеко не каждая лаборатория.

Ещё один важный показатель – D-ДИМЕР (это продукт распада фибрина, небольшого фрагмента белка, присутствующего в крови после разрушения тромба).

Он активно используется для определения риска тромбообразования. Те, у кого D-димер даже незначительно повышен, рискуют столкнуться с появлением тромбов значительно больше остальных. Контролировать D-димер необходимо при заболеваниях вен (тромбофлебиты), после проведенных оперативных вмешательств и при выписке из стационара, если вы были долго прикованы к постели. наблюдать за уровнем D-димера полезно во время беременности и при приеме гормональных контрацептивов (риск образования тромбов при наличии мутации Лейдена на фоне приема противозачаточных таблеток возрастает почти в 9 раз). А теперь и во время COVID-19 и несколько недель после выздоровления.

Мерцающая проблема

Фактор Виллебранда и COVID-19.

Генетические мутации системы свёртывания, выявляемые в ходе анализов:

МУТАЦИЯ V КОАГУЛЯЦИОННОГО ФАКТОРА СВЁРТЫВАЕМОСТИ КРОВИ (ФАКТОР ЛЕЙДЕНА)

ИНГИБИТОР АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА 1

МУТАЦИЯ II КОАГУЛЯЦИОННОГО ФАКТОРА (МУТАЦИЯ ПРОТРОМБИНА)

МУТАЦИЯ МЕТИЛЕНТЕТРАГИДРОФОЛАТРЕДУКТАЗЫ (MTHFR C677T)

МУТАЦИЯ VII КОАГУЛЯЦИОННОГО ФАКТОРА СВЁРТЫВАЕМОСТИ КРОВИ (F7 ARG353GLN)

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА РЕДУКТАЗЫ МЕТИОНИНСИНТАЗЫ (MTRR A66G)

МУТАЦИЯ ФИБРИНОГЕНА, БЕТА (FGB G-455A)

МУТАЦИЯ ПРОМОТОРА ГЕНА КОАГУЛЯЦИОННОГО ФАКТОРА FVII (-312 INS 10BP)

ИНСЕРЦИЯ/ДЕЛЕЦИЯ ALU-ЭЛЕМЕНТА В ГЕНЕ АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНА (ALU INS/DEL)

МУТАЦИЯ ТРОМБОЦИТАРНОГО ГЛИКОПРОТЕИНА 1B, АЛЬФА СУБЪЕДИНИЦЫ

МУТАЦИЯ АДФ-РЕЦЕПТОРА ТРОМБОЦИТОВ (P2RY12 H1/H2)

МУТАЦИЯ A1298С ГЕНА МЕТИЛЕНТЕТРАФОЛАТРЕДУКТАЗЫ

D-димер значительно повышается у большинства больных со среднетяжёлым и тяжёлым течением COVID-19. Поэтому все пациенты получают лечебные дозы антикоагулянтов.

Мутация Лейдена - наиболее частое скрытое нарушение свёртываемости крови, встречается у 2-6% европейцев.

Данный материал взят из книги “Диагностические тест-системы: Радиоиммунный и иммуноферментный методы диагностики” Таранова Анатолия Григорьевича и размещен на сайте с любезного разрешения автора.

ТЕХНИКА ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ

2.1. Условия взятия и хранения биологического материала

Подготовка к проведению лабораторных исследований содержит два основных момента: необходимость соблюдения стандартных условий взятия биологического материала и предотвращение деградации биологически активного вещества в образцах.

Перед получением образца крови медицинскому работнику необходимо знать следующее:
1) некоторые биологические вещества, например гормоны, после приема пищи могут иметь повышенную концентрацию; ,
2) содержание ряда веществ подвержено влиянию циркадных (суточных) колебаний;

3) множество лекарственных веществ способны влиять на определяемые вещества, повышая или понижая их уровень в крови;

4) взятие исследуемого образца у пациентов в горизонтальном, в вертикальном положении или после физической нагрузки изменяет уровень биологически активных веществ иногда более чем на 10 %.

Желательно, чтобы кровь, предназначенная для исследования, забиралась в однотипные центрифужные пробирки. Такие пробирки должен готовить (мыть, высушивать, добавлять коагулянт или ингибитор ферментов) один сотрудник. Кровь без добавок отстаивают, а с добавками центрифугируют, полученную сыворотку или плазму разливают в такое количество мелких пластмассовых или стеклянных пробирок (стекло не всегда выдерживает низкую температуру), которое равно или превышает число разных типов тестирования.

В биохимической деятельности организма большую роль играют биологические ритмы. Пульсирующий характер секреции многих веществ от нескольких минут до суток - все это должно быть учтено при взятии биологического материала. Вне связи с временным фактором и конкретным физиологическим состоянием не существует абсолютных нормативных показателей вещества. Если не преследуется специальная цель исследовать циркадный ритм биологической активности, периферическую венозную или капиллярную кровь у пациентов желательно брать утром натощак в одно и то же время, в условиях физиологического покоя, что особенно важно при исследовании веществ, секреция и метаболизм которых протекает в течение суток неодинаково.

Во время процедуры взятия крови следует избегать гемолиза, который некоторым возможен при длительном венозном застое, энергичной аспирации крови шприцем, попадании в просвет иглы воды и детергентов, действии на кровь высокой и низкой температур.

2.1.1. Получение сыворотки или плазмы крови

Цельная кровь (капиллярная и венозная) используется в основном в биохимических исследованиях (определение глюкозы, показателей КЩР, определение концентрации электролитов в эритроцитах) и гематологии (исследование LE-клеток, гематокрита, на малярию, проведение стандартного клинического анализа крови). Для радиоиммуиных и иммуноферментных методов получают сыворотку или плазму.

Вопрос о том, что лучше брать для анализа - плазму или сыворотку - не имеет однозначного ответа. Некоторые исследователи предпочитают сыворотку, так как стероиды, например, из нее экстрагируются легче и полнее, чем из плазмы. Кроме того, плазма нередко образует эмульсию с органическими растворителями во время экстракции, а после замораживания и оттаивания в ней появляются хлопья фибрина, мешающие определению. Для биохимических исследований чаще используется сыворотка венозной крови, полученной у пациента при определенных условиях.

При выборе вида материала следует учитывать следующее:

1) При получении сыворотки крови возникает опасность того, что при отстаивании крови из эритроцитов интенсивно освобождаются протеолитические ферменты, которые могут разрушить определяемое вещество и повредить его меченый аналог во время инкубирования. Поэтому для определения содержания белковых соединений предпочтительно готовить плазму крови.

2) При получении плазмы часто используют гепарин или цитрат. Первый блокирует связывание антитела с антигеном, второй существенно изменяет кислотность среды, к которой чрезвычайно чувствительны некоторые вещества. Поэтому в сухую центрифужную пробирку желательно насыпать 50 мг ЭДТА на 5 мл крови (1:100). Сразу же после забора кровь перемешать с ЭДТА и отцентрифугировать. ЭДТА является слабым антикоагулянтом, блокатором протеолитических ферментов и составной частью многих буферных смесей.

2.1.2. Обработка крови для лабораторных исследований

Полученная и доставленная в лабораторию кровь должна быть быстро обработана, или подвергнута исследованию. Длительное стояние сыворотки над эритроцитами может привести к сдвигам концентраций составляющих, поэтому время стояния сыворотки над сгустком должно быть ограничено. Кроме того, биологический полураспад некоторых исследуемых веществ настолько мал, что стояние сыворотки при высокой комнатной температуре может полностью исказить полученные результаты исследования.

В начале обработки чистой сухой стеклянной палочкой сгусток крови осторожно отделяется от стенок пробирки, пробирка взвешивается и подготавливается к центрифугированию.
Подавляющее количество лабораторных образцов для исследований рекомендуется центрифугировать при +4 °С, со скоростью вращения 500 - 1000 g (1500 - 3000 об/мин) не более 15 - 20 минут. Высокая скорость вращения, как правило, приводит к гемолизу сыворотки или плазмы.

Полученную сыворотку (плазму) необходимо быстро отделить от форменных элементов крови и плотно закрыть пробирки крышкой. Если получена липемическая или гемолизированная сыворотка, образец, как правило, выбрасывается.

2.1.3. Хранение крови (плазмы, сыворотки)

Для определения большинства биологического материала считается возможным хранение его при комнатной температуре не более 6-8 часов.

Некоторые образцы разрешается хранить в течение недели при + 4°С. При необходимости хранения сыворотки (плазмы) более суток, образец рекомендуется замораживать при -20°С, что позволяет проводить исследования, например, спустя несколько месяцев - раковые маркеры, мочевину, холестерин, большинство гормонов и т.д.

При работе с кровью общим правилом должно являться немедленное отделение плазмы или сыворотки от форменных элементов, так как некоторые вещества могут поглощаться и инактивироваться эритроцитами и лейкоцитами. Но даже в простых водных растворах они спонтанно окисляются (например, кортизол превращается в 21-дезоксикортизол).

Большинство веществ биологического происхождения при низкой температуре более стабильны, чем при комнатной, поэтому их обычно хранят в замороженном состоянии. В пробах крови после ее взятия происходит огромное количество процессов. Быстро размножающиеся бактерии и ферментативный гидролиз могут кардинально изменять состояние и содержание всех компонентов. Наиболее эффективным средством замедления и предотвращения таких изменений являются замораживание и быстрое центрифугирование. Однако, даже при –20 °С биологическая система не стабильна, поскольку активность многих ферментов при этом не изменяется. Естественным следствием этого является снижение концентрации веществ при длительном хранении при - 40, -70°С. На примере АКТГ видно, что температурный режим и физико-химические параметры среды имеют решающее значение для сохранности вещества. При хранении АКТГ в течение 18 месяцев при –17 °С его активность, измеряемая биологическим методом, не изменяется. При 37 °С через 45 минут гормон инактивируется на 64 %, через один день при комнатной температуре - на 85%, при 3°С - на 58%. Но кортикотропная активность кислого экстракта аденогипофиза, полученного гомогенизацией ткани в 0,1 % соляной кислоте, сохраняется при 2°С не менее 39 дней.

Плазму или сыворотку непосредственно после получения запаивают в стеклянные ампулы или помещают во флакончики с плотно закрывающимися крышками, замораживают и хранят при температуре не выше -20°С. При таких условиях образцы пригодны для анализа в течение нескольких месяцев, иногда до года. При повторном замораживании и оттаивании происходит частичная деградация белковых веществ (соединений), в то время как для веществ с малым молекулярным весом (например, стероидные гормоны) эти процедуры не столь опасны.

Образцы крови необходимо хранить в хорошо закрытых пробирках, так как потеря в образце влаги в замороженном состоянии может привести к концентрированию исследуемого вещества и получению в итоге ошибочного результата.

По экономическим соображениям важно до госпитализации и до любых терапевтических вмешательств взять образцы плазмы или сыворотки и поместить их в банк сывороток. После установления диагноза, если нет нужды в исследовании биологического материала, и образец не нужен для исследований, он может быть изъят из банка сывороток или плазм, однако, в наличия патологического процесса (особенно опухоли) возможно повторное определение уровня исследуемых веществ или их комбинаций. Кроме того, исследуемый образец рекомендуется оставлять в банке сывороток с тем, чтобы при модификации наборов фирмой-поставщиком, можно было корректно продолжить мониторинг больного. Этот подход также может оказаться полезным, если появится новый маркер, отличающийся более высокой чувствительностью и специфичностью.

При медленном замораживании образуются кристаллы льда, которые разрывают молекулы, особенно белковые, поэтому для оптимальной стабильности вещества необходимо быстрое замораживание. Лучше всего замораживание проводить с самого начала в жидком азоте - в этой среде процесс замораживания идет намного быстрее и не сопровождается разрушением охлаждаемых веществ. Нет общих правил относительно размораживания, однако эксперименты показывают, что следует избегать теплового шока образцов. Размораживание следует производить медленно и постепенно. Некорректно переносить образец сразу же из –20 °С в комнатную температуру, особенно учитывая сезонные различия температур помещения. Важно избегать повторного замораживания образца, лучше предварительно разделить его на несколько пробирок, чтобы не было проблем в случае повтора анализа.

Размораживание и повторное замораживание повреждает практически все биологические пробы. Существует ошибочное мнение о том, что такое воздействие не влияет на тиреоидные и стероидные гормоны. Действительно, структура молекул этих гормонов лучше сохраняется в таких ситуациях. Однако следует помнить, что основной пул стероидных и тиреоидных гормонов циркулирует под “защитой” транспортных белков, которые, как и все другие белки, не выдерживают температурных перепадов и, разрушаясь, перестают “защищать” гормоны. Последние, освобождаясь, немедленно включаются в метаболическую цепь, что, в конечном итоге, ведет к искажению истинной картины.

Химическое окружение, в котором находится препарат, также является важным фактором. При хранении белков в растворах концентрация этих белков всегда должна быть больше 1 мг/мл. Известно, например, что разбавленная антисыворотка теряет активность намного быстрее, чем неразбавленная. Молекулы некоторых веществ биологического происхождения особенно легко разрушаются при окислении, поэтому их надо хранить в присутствии какого-нибудь восстановителя или в атмосфере, не содержащей кислорода.

Учитывая высокую скорость разрушения биологически активных веществ в органах и тканях, извлечение их и приготовление навесок анализа необходимо проводить в условиях постоянного охлаждения, хранить образцы только в замороженном состоянии. Предварительная обработка материала позволяет значительно увеличить его срок хранения. Например, после обработки гипофиза ацетоном первоначальный уровень гонадотропной активности сохраняется в нем при хранении в холодильнике без замораживания не менее года. Экстракты гормонов и чистые препараты сохраняются гораздо дольше, чем нативные образцы.

Известно, например, что в тканях гипоталамуса рилизинг-фактор к лютеинизирующему гормону подвергается сравнительно быстрому метаболическому разрушению. В то же время при хранении в стерильных условиях растворов синтетического ЛГ-рилизинг-гормонов в течение 18 месяцев при 40 °С он полностью сохранял свою биологическую активность и иммунореактивные свойства.

2.1.4. Получение, обработка и хранение мочи

Сбор мочи для определения биологически активных веществ проводят в течении заданных интервалов времени, чаще всего за сутки. На протяжении суток скорость образования и экскреции вещества с мочой колеблется весьма значительно, но эти колебания нивелируются при исследовании суточной порции мочи. В последнее время появляется возможность определять не в суммарной суточной моче и не суммарные вещества, а конкретные вещества и в любое время суток. Например, определение андрогена надпочечникового происхождения дегидроэпиандростерона-сульфата, или 17-окси-прегненолона, предназначенного для выявления адреногенитального синдрома.

Из рациона человека, по меньшей мере, за трое суток до сбора мочи
необходимо исключить продукты и лекарственные препараты, влияющие на
секрецию и метаболизм ряда веществ. Присутствие в моче некоторых
веществ эндогенного и экзогенного происхождения может искажать
результаты определения веществ. Сбор мочи производят в сосуды из дифферентного материала (стекла, пластмассы) во избежание разрушения вещества.

При сборе мочи также соблюдают определенные предосторожности, ли моча не содержит стабилизаторов, как, например, при определении стероидов и их метаболитов, она должна храниться до анализа в замороженном виде (как правило, не более 10 дней). Замороженную мочу со стабилизатором, предназначенную для определения катехоламинов, допускается хранить не более трех дней.

2.1.5. Получение экссудатов и транссудатов

Перед сбором экссудатов и транссудатов в посуду для сбора рекомендуется добавить 2 капли гепарина или на кончике ножа сухого цитрата натрия для предотвращения свертывания. Жидкость собирается в чистую сухую посуду и немедленно доставляется в лабораторию.

2.1.6. Сбор и хранение кала

Для исключения возможных погрешностей в диагностике запрещено доставлять кал после использования клизм, введения свечей, приема внутрь касторового и вазелинового масел и красящих веществ. Кал, взятый для исследования на дисбактериоз, должен быть срочно доставлен в лабораторию, или поставлен в холодильник при 4°С. При исследовании на простейшие запрещено сохранять кал в термостате или теплой воде, поскольку при этом происходит гибель и регенеративные изменения простейших.

2.1.7. Сбор и хранение мокроты

Мокроту рекомендуется собирать при кашле в сухую чистую посуду не более суток, так как при длительном хранении происходит разложение флоры и аутолиз элементов мокроты. Кратковременное хранение ее рекомендуется проводить в холодильнике при 4°С. Для бактериологических исследований мокрота не должна стоять более 4 часов с момента получения.

2.1.8. Сбор и хранение ликвора

Спинномозговая жидкость (ликвор), полученная при люмбальной пункции или пункции желудочков мозга, собирается в сухую чистую посуду и доставляется в лабораторию немедленно, так как при хранении в связи с разрушением клеточных элементов результат исследования может быть недостоверным.

2.2. Обработка лабораторной посуды

В специальных пособиях приводится много советов по тех лабораторных работ, поэтому мы ограничимся лишь некоторыми рекомендациями, имеющими существенное значение для постановки реакции и получения высококачественного результата в радиоиммунных и иммуноферментных методах диагностики. При работе с буферными системами, органическими растворителями и другими веществами, применяемыми для постановки реакции, особое внимание нужно обращать на чистоту реактивов. Вода для буферного раствора должна быть бидистиллированной и деионизированной. Органические растворители, как правило, подлежат очистке (например, эфир пропускается через колонку с оксидом алюминия) и двойной перегонке с дефлегматором (напр., при получении абсолютного этанола).

Лабораторная посуда должна быть тщательно обрабатывается механическими и химическими способами.

Приготовление моющего раствора:

на 1 л дистиллированной воды 20 г порошка типа "Лотос".

Приготовление хромовой смеси:

в фарфоровом стакане растворяют 50 г бихромата калия (K 2 Cr 2 O 7 ) в 100 мл воды. Раствор сливают в сосуд большего размера и добавляют (очень осторожно) 1 л серной кислоты (концентрированной).

Внимание! Добавлять серную кислоту в раствор, но не наоборот!

2.2.1. Обработка посуды с низкой радиоактивностью

Флаконы - снять надписи с крышек ватой, смоченной в спирте, снять крышки в коробку с надписью “грязные крышки”, слить из флаконов сцинтилляционную жидкость в сосуд для жидких радиоактивных отходов, под струей горячей воды прополоскать флаконы от толуола (до исчезновения запаха), загрузить в бак с моющим раствором, оставить на ночь. На следующий день промыть флаконы сначала под струей холодной воды (налить-вылить 10-15 раз), затем также под струей горячей воды и окончательно под струей дистиллированной воды. Сушить в сушильном шкафу при температуре 150-200 °С вниз горлышком.

Пробирки - снять надписи ватой, смоченной спиртом, промыть под струей горячей воды (налить-вылить 10-15 раз), высушить в термостате или сушильном шкафу при температуре до 150 °С, дать остыть и загрузить в (хромовую смесь на 2-3 часа, (БУДЬТЕ ПРЕДЕЛЬНО ОСТОРОЖНЫ!) , вынуть их из хромовой смеси и промыть как флаконы (см. выше).

Крышки - тщательно протираются ватой, смоченной спиртом (два тампона на крышку), высушиваются при комнатной температуре и хранятся в коробке с надписью “чистые крышки”.

2.2.2. Обработка посуды с высокой радиоактивностью

Флаконы - обрабатывать 96° спиртом: заполнить флакон спиртом, перелить спирт во второй флакон, затем в третий, . в десятый, слить в сосуд для жидких радиоактивных отходов. Процедуру повторить. Последующая обработка флаконов аналогична обработке флаконов с низкой активностью. Крышки загрузить в сосуд, залить ацетоном или 96° спиртом с полным погружением крышек, перемешать 3-5 мин, стеклянной палочкой, жидкость слить в емкость для радиоактивных отходов. Процедуру повторить. Разложить на фильтровальной бумаге в один слой и сушить в вытяжном шкафу. Хранить в коробке с надписью “чистые пробирки”.

Все вышеописанные работы проводить только в вытяжном шкафу при полном отсутствии открытого огня.

Для выполнения биохимических исследований в лаборатории посуда проходит определенный цикл обработки в соответствии с требованиями санитарно-гигиенических и противоэпидемических служб. При выполнении в лабораториях коагулологических исследований или проведения исследований определения ряда пептидных гормонов биологическими методами помимо обычной чистой стеклянной посуды используют силиконированную посуду для взятия и хранения крови и плазмы.

2.2.3. Силиконирование посуды

Силиконирование посуды осуществляют для предотвращения контаминации исследуемого образца со стеклом, в котором проводят химическую реакцию. Силиконирование тормозит активацию свертывания крови, предохраняя распад некоторых веществ (например, пептидных гормонов) при инкубации их со встряхиванием.

Стекло покрывается мономолекулярной пленкой силикона:

5% раствор дихлордиметилсилана в толуоле. Чистая сухая посуда заполняется раствором и сразу же выливается. Силиконирование проводят в вытяжном шкафу, затем проводят сушку посуды в сушильном шкафу 180°С в течение часа.

Раствор для силиконирования хранят в посуде с притертой пробкой
в вытяжном шкафу.

Использовать силиконированную посуду не более 5 раз, затем силиконирование необходимо повторить.

Медицинская компания ОМБ, Москва

Взятие венозной крови: некоторые вопросы преаналитики

Журнал: Лабораторная служба. 2012;(2): 34-38

Сапенко Т. П. Взятие венозной крови: некоторые вопросы преаналитики. Лабораторная служба. 2012;(2):34-38.
Sapenko T P. Venous blood sampling: some issues of preanalytics. Laboratory Service. 2012;(2):34-38.

Медицинская компания ОМБ, Москва

Преаналитический этап лабораторных исследований - основной источник ошибок и некорректных результатов. Правильно проведенная преаналитическая подготовка является одним из основных условий точной лабораторной диагностики. В настоящее время большинство клиник применяет вакуумный способ взятия венозной крови. Этот способ максимально удобен как для пациента, так и для медицинского персонала. Современные требования к получению биоматериала подробно описаны в Национальных Стандартах, однако, выполняя эти требования, медицинский персонал часто сталкивается с целым рядом сложностей. Также при исследовании ряда показателей возможны ошибки, связанные с невыполнением специальных требований к преаналитическому процессу для данного параметра. Проблемы, связанные с преаналитическим этапом лабораторных исследований, не могут быть решены одним сотрудником и требуют совместных действий врачей, медицинских сестер и другого персонала лаборатории, участвующих в рабочем процессе лечебного учреждения.

Медицинская компания ОМБ, Москва

Преаналитический этап начинается гораздо раньше, чем обычно описывается в учебных пособиях. Необходимо помнить, что любой лечебный процесс включает не только оценку диагностической ценности теста, но и необходимость назначения контролирующих, сопутствующих и дополнительных процедур и исследований. Поэтому назначение исследования и подготовку пациента к взятию биоматериала также следует рассматривать как составляющие преаналитического этапа.

Взятие биоматериала, транспортировка, хранение и пробоподготовка делятся на внелабораторную и лабораторную части. Основная задача этих этапов - обеспечение стабильности (сохранности) полученных биоматериалов и сведение к минимуму влияния различных факторов, изменяющих их качество.

Правильно проведенная преаналитическая подготовка - одно из основных условий точной лабораторной диагностики.

В настоящее время большинство клиник применяет вакуумный способ взятия венозной крови. Этот способ максимально удобен как для пациента, так и для медицинского персонала.

Современные требования к получению биоматериала подробно описаны в Национальных Стандартах, однако, выполняя эти требования, медицинский персонал часто сталкивается с целым рядом сложностей:

1. Кровь не поступает в пробирку.

Возможно несколько причин этого, и для каждой из них существует свой способ решения:

2. При венепункции внезапно ток крови быстро прекращается, не наполнив пробирку.

В данном случае медицинский персонал должен обращать внимание на следующие возможные причины и знать пути решения проблемы:

3. Гемолиз в пробирке.

1. Перенос образца происходит под избыточным давлением, что приводит к вспениванию крови, гемолизу и денатурации белков.

- искажает результаты, связанные с определением активности и концентрации всех белков и ферментов, активность которых напрямую зависит от сферической конфигурации молекулы белка;

- приводит к повышению мутности образца, что искажает результаты фотометрических методик;

гемолиз - основная причина отказа лаборатории принять образец к исследованию. Любая гемолитичная проба считается заведомо некорректной.

2. Перенос образца крови в пробирку с реагентами обусловливает необходимость точного дозирования, при выдавливании крови поршнем часто пробирка переполняется.

3. Манипуляции с открытой иглой несут риск ранения персонала контаминированной иглой.

Использование специального держателя для безопасного переноса крови из шприца в пробирку позволяет избежать этих проблем.

Держатель для переноса крови из шприца в пробирку из линии продукции VACUETTE предназначен для корректного переноса проб крови из шприцев. Конструкция держателя исключает риск травмы медицинского персонала и облегчает перенос крови без дополнительных манипуляций. Держатель соответствует рекомендациям H3-A5 CLSI (Институт клинических и лабораторных стандартов). Выполните следующие действия: наберите пробу крови в шприц, используя процедуру, принятую в Вашем медицинском учреждении (рис. 2, а), Рисунок 2. Держатель для переноса крови из шприца в пробирку VACUETTE (а). Объяснение в тексте. вставьте пробирку в держатель для переноса крови из шприца в пробирку и надавите, чтобы игла держателя проколола пробку (рис. 2, б), Рисунок 2. Держатель для переноса крови из шприца в пробирку VACUETTE (б). Объяснение в тексте. как только проба перестанет поступать в пробирку, осторожно выньте пробирку из держателя, продолжая удерживать его другой рукой (рис. 2, в). Рисунок 2. Держатель для переноса крови из шприца в пробирку VACUETTE (в). Объяснение в тексте.

Кроме того, при исследовании ряда показателей возможны другие ошибки, связанные с невыполнением специальных требований к преаналитическому процессу для данного параметра.

1. Определенное время взятия крови. В некоторых случаях кровь необходимо брать в определенное время: при приеме некоторых лекарственных препаратов, натощак и/или вследствие суточных колебаний биологических параметров (циркадного ритма). Важно, чтобы взятие таких проб производилось в течение строго установленного промежутка времени. Следует дать необходимые указания персоналу, проводящему венепункции, чтобы он точно соблюдал эти правила.

Примеры исследований, при которых требуется взятие крови в определенный промежуток времени:

- исследования показателей, изменяющихся в течение суток (например, глюкоза, кортикостероиды и другие гормоны, железо сыворотки крови);

- мониторинг терапии (например, протромбиновое время, АЧТВ, концентрация салициловой кислоты, дигоксина и других лекарственных препаратов).

Во многих из перечисленных ситуаций необходимо точно записывать на бланке направления дозу препарата и время его последнего приема, а также время взятия крови.

2. Особенности взятия крови для отдельных исследований:

- определение содержания алкоголя в крови. При взятии пробы для определения содержания алкоголя в крови дезинфекцию места венепункции следует проводить не содержащим спирт веществом (например, мылом);

- образцы для культивирования крови. При взятии, транспортировке и хранении образцов для культивирования крови необходимо соблюдать определенные временные и температурные условия. Кроме того, существуют различия в объеме крови, необходимой для культивирования. Обычно на один анализ необходимо взять 10-20 мл крови взрослого и 1-2 мл крови новорожденного;

- микроэлементы. В линии продукции VACUETTE представлены специальные пробирки для определения концентрации микроэлементов.

3. Особенности взятия крови с помощью катетеров. Существует ряд систем, качество которых имеет большое значение при проведении лабораторной диагностики у пациентов в клиниках ургентных состояний. В первую очередь это касается катетеров и фистул.

Возможные ошибки

Постоянные катетеры обычно устанавливаются пациентам, находящимся в тяжелом состоянии, получающим массивную инфузионную терапию. Взятие проб крови из постоянных катетеров может привести к ошибочным результатам исследований из-за неполного промывания всей длины катетера. Это приводит к контаминации образца лекарственными средствами и/или разбавлению образца крови (рис.3). Рисунок 3. Особенности взятия крови с помощью катетеров. Одноразовый держатель HOLDEX предназначен для использования с иглами-бабочками VACUETTE, иглами Луэра или катетерами.

Промывание катетеров

Перед взятием пробы нужно удалить из катетера достаточное количество крови, чтобы быть уверенным, что проба не разбавлена и не контаминирована. Объем удаляемой крови зависит от внутреннего объема конкретного катетера. Для исследования системы гемостаза кровь рекомендуется сливать в количестве не менее 6 объемов катетера (5-7 мл), для других исследований - не менее 2 мл.

Инфузионная терапия

Если пациенту внутривенно вводятся растворы, по возможности не следует брать кровь из этой же руки. Показано, что кровь, взятая проксимальнее места внутривенной инфузии, разбавлена вводимым раствором. Кроме того, раствор может содержать исследуемый аналит. Результаты исследования крови в этом случае будут ошибочными. Необходимо найти место для взятия крови на другой руке. Иногда внутривенная инфузия может проводиться с обеих рук.

Удовлетворительные образцы могут быть получены при взятии крови дистальнее места внутривенной инфузии. Для этого рекомендуется следующее:

- отключить капельницу как минимум за 2 мин до венепункции;

- наложить жгут дистальнее места инфузии;

- выбрать вену, в которую не проводится инфузия;

На бланке направления должно быть отмечено, что этот образец брался из руки, в которую проводилась внутривенная инфузия.

Если вены недоступны, рекомендуется взять капиллярную кровь.

Из-за возможного возникновения ошибок при исследованиях следует избегать взятия крови из места внутривенной инфузии в течение первых 2 сут после ее отмены (рис. 5). Рисунок 5. Подготовка вены к инфузионной терапии.

В заключение следует отметить, что в данной статье мы рассмотрели только некоторые вопросы, влияющие на преаналитический этап. Проблемы, связанные с преаналитическим этапом лабораторных исследований, не могут быть решены одним сотрудником и требуют совместных действий врачей, медицинских сестер и другого персонала лаборатории, участвующих в рабочем процессе лечебного учреждения. Надеемся, что рассмотренные выше ошибки, которые возникают при работе с вакуумными пробирками, и способы их решения, а также особенности взятия венозной крови позволят читателям произвести правильную оценку и повысить качество исследований.

Взятие крови из вены с помощью вакуумной системы является наиболее безопасным и эффективным способом забора. Использование вакуумных пробирок, так называемых вакутейнеров, обеспечивает правильную процедуру сбора образца, транспортировки и качественный анализ.

Особенности и преимущества вакутейнеров

Трехкомпонентная система для забора венозной крови состоит из:

стерильной вакуумной пробирки с консервантом;
двусторонней автоматической иглы для внутривенной инъекции;
автоматического иглодержателя.

Преимущества систем с отрицательным давлением связаны с их конструктивными особенностями:

безопасность, стерильность и гарантия целостности образца;
минимизация микросгустков и гемолиза;
соблюдение постоянного времени между забором и соединением с добавкой;
точное соотношение образца и добавки;
минимизация эффекта жгута.

Алгоритм взятия крови с помощью вакуумной системы

Методика забора венозной крови вакуумными пробирками аналогичен использованию шприца, при этом обеспечивает большую безопасность, оперативность и удобство. Взятие осуществляется быстро, что важно для гарантии точного результата исследования.

При заборе крови из периферической вены с помощью вакуумной системы потребуются:

вакуумные пробирки;
жгут;
вата (ватные тампоны) или салфетки;
антисептическое средство (медицинский спирт);
бактерицидный пластырь;
стерильный медицинский лоток;
медицинская спецодежда (халат, очки, маска и перчатки).

Перед проведением процедуры необходимо оформить направление пациента, обработать руки специальным раствором, надеть защитную медицинскую одежду.

Техника забора крови из вены

Возможные ошибки при использовании вакуумных пробирок

Проблема	Возможные причины	Решение
Кровь не поступает в пробирку после соединения с держателем	Игла не попала в вену	Во всех перечисленных случаях необходимо осторожно скорректировать положение иглы. Отсоединять пробирку от держателя не нужно, если нет необходимости вынуть иглу и-под кожи.
	Кончик иглы уперся в венозную стенку
	Вена проткнута насквозь
Кровь в пробирку поступила в меньшем количестве, чем необходимо для проведения анализа	Венозный сосуд спался из-за низкого давления	Необходимо отсоединить пробирку от держателя и подождать некоторое время, пока вена снова наполнится
	Систему нужно заменить и выполнить процедуру заново	В пробирку попал воздух

Читайте также: