Как сделать рнк

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 04.10.2024

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Исследование урогенитального тракта методом ПЦР на ИППП ;

Выявление ДНК хламидий, гонококка, трихомонады, микоплазмы гениталиум, вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов, цитомегаловируса в урогенитальном соскобе используется для подтверждения инфицированности при наличии клинических признаков воспаления урогенитального тракта, для дифференциальной диагностики урогенитальных инфекций.

тест методом ПЦР на коронавирус Covid-19, мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2;

• Определение РНК вируса SARS-CoV-2 (все виды известных штаммов, включая Delta и Omicron)
• Производитель - АО Вектор-Бест
• Возможен предварительный заказ на сайте
• Справка о результатах анализа на русском и английском языках
• Справка выдается только при отрицательном результате исследования!

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
термостабильная ДНК-полимераза;
дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.

Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

ВАЖНО!

Американская исследовательница Каталин Карико вместе с коллегой Дрю Вайсманом создала технологию синтеза мРНК. Благодаря ей компании BioNTech, Pfizer и Moderna смогли разработать свои вакцины от коронавируса, а Карико и Вайсман вошли в число лауреатов престижной премии Breakthrough Prize. Однако для того, чтобы привлечь внимание научного сообщества к самой идее использования мРНК, Карико понадобились годы упорного труда

Одни из первых вакцин от COVID-19 — от компаний Pfizer и Moderna — созданы на основе мРНК. Разработчики этой технологии — Дрю Вайсман и Каталин Карико из Университета Пенсильвании, которые получили за свое открытие премию Breakthrough Prize и $3 млн.

Каталин Карико родилась в венгерском Кисуйсаллаше в семье мясника и с детства мечтала заниматься наукой. По окончании Сегедского университета в 1978 году поступила в аспирантуру и начала работать в лаборатории профессора Йено Томаша, который занимался синтезом кэпов — молекулярных структур на концах мРНК. Диссертация Карико была посвящена синтезу олигонуклеотидов (коротких отрезков ДНК и РНК) и изучению их противовирусных эффектов. Однако в середине 1980-х университет перестал финансировать эти исследования, и Карико вместе с семьей переехала в США. Венгерское правительство разрешало вывозить не более $100 наличными, и, чтобы взять больше денег, Каталин зашила их внутрь плюшевого мишки своей дочери Жужанны.

В 1989 году она устроилась на работу к доктору Эллиоту Барнатану, в то время кардиологу в Пенсильванском университете. Им удалось создать мРНК, которая, встраиваясь в клетки-мишени in vitro (в пробирке), заставляла их производить белок-рецептор урокиназы. Карико казалось, что успешный эксперимент сулит замечательные открытия, но доктор Барнатан вскоре покинул университет и устроился в биотехнологическую компанию.

Карико осталась без работы. Ей помог коллега по лаборатории доктора Барнатана — доктор Дэвид Лангер, который замолвил за нее словечко руководству. Исследования Карико казались ему перспективными: он надеялся использовать синтетические мРНК для лечения пациентов, у которых после операции на головном мозге в сосудах образуются тромбы. Расширению сосудов способствует оксид азота NO, но он почти мгновенно вступает в реакцию с кислородом, поэтому ввести его пациенту в виде препарата невозможно. Тем не менее под действием определенных ферментов его могут вырабатывать сами клетки сосудов, а чтобы заставить организм вырабатывать эти ферменты, Лангер и хотел использовать мРНК.

Однако их эксперименты in vivo (на живых организмах) не принесли результата, а вскоре и Лангер покинул университет. Карико опять осталась одна.

Она познакомилась с доктором Дрю Вайсманом и вместе с ним приняла участие в клиническом исследовании использования двухцепочечных РНК (они встречаются, в частности, у некоторых вирусов) для лечения различных заболеваний. А в 1990 году подала первую заявку на грант, в которой предлагала создать генную терапию на основе мРНК.

У мРНК, которую синтезировали Карико и Вайсман, был серьезный изъян — она вызывала иммунный ответ, который не только уничтожал молекулу раньше, чем она добиралась до клетки-мишени, но и мог навредить пациенту. Исследовательница была уверена в том, что придумает, как преодолеть это препятствие. Но другие считали иначе: все заявки Карико на гранты были отклонены. Ее коллега по университету вспоминал, что Карико с нечеловеческим упорством раз за разом пыталась получить финансирование, чтобы продолжить исследования. А ее муж, подсчитав бесконечные сверхурочные ученой, пришел к выводу, что она зарабатывает примерно по $1 в час. Однако в конце концов Карико добилась лишь понижения в должности, что, казалось, перечеркнуло ее академическую карьеру.

Тем не менее ее упорство принесло плоды. В 2004 году Карико и Вайсман придумали, как предотвратить негативную реакцию организма. Ученые заметили, что контрольная группа молекул — транспортные РНК (тРНК) — не вызывает такую реакцию организма, как матричные. Оказалось, что уклоняться от иммунного ответа тРНК позволяет небольшое отличие в составе нуклеозидов (нуклеозиды входят в состав нуклеотидов, которые в свою очередь являются структурными элементами РНК): вместо нуклеозида уридина тРНК содержит его изомер (то есть аналогичный по составу, но отличающийся по структуре) псевдоуридин. Карико и Вайсман заменили уридин на псевдоуридин в своих синтетических мРНК. Новые гибридные мРНК теперь не вызывали иммунный ответ.

По воспоминаниям Вайсмана, в тот момент это открытие никого не заинтересовало.

В 2006 году Карико и Вайсман основали компанию под названием RNARx, которая получила от правительства США гранты на сумму около $900 000. С помощью инъекций синтетической мРНК они смогли добиться у лабораторных мышей и обезьян повышения выработки эритропоэтина — гормона, который назначают для лечения некоторых форм анемии. Однако из-за разногласий с руководством университета исследования пришлось прекратить. Патент на разработку ученых университет продал компании Cellscript.

Одну из таких вакцин разработала компания Pfizer в сотрудничестве с немецкой компанией BioNTech. Ее вместе с мужем основала другая ученая — Озлем Туречи, которая также занималась изучением мРНК. А Каталин Карико занимает в компании пост старшего вице-президента — в частности, работает над созданием лекарств от рака. Кроме того, она адъюнкт-профессор в Пенсильванском университете: спустя более 20 лет она все же добилась справедливого повышения.

К тексту ниже следует отнестись максимально серьезно и довести его до сведения возможно бОльшего числа ваших знакомых - ибо речь в нем идет о крайне опасных вещах, а именно - об угрозе изменения ДНК человека, подвергнутого вакцинации мРНК-вакцинами против ковид. Об этом предупреждали многие исследователи, но сегодня получены экспериментальные данные, подтверждающие худшие из опасений. Они опубликованы в статусном научно-медицинском журнале и обсуждаются специалистами - но широкая общественность, вероятно, не увидит этих данных никогда. А ведь речь идет о вторжении в святая святых - геном, о генетической модификации человека. ГМО-человек - результат необратимый и ничто не исправит содеянное.

Перед статьей об исследовании и сущности РНК-вакцин совсем краткий ликбез по роли мРНК в синтезе белка -

Могут ли мРНК-вакцины навсегда изменить ДНК? Последние научные исследования предполагают, что могут.
[ Нажмите, чтобы прочитать ]
Исследования РНК SARS-CoV-2, проведенные учеными из Гарварда и Массачусетского технологического института, имеют значение для того, как вакцины с мРНК могут навсегда изменить геномную ДНК, по словам Дуга Корригана, доктора философии, биохимика-молекулярного биолога, который считает, что необходимы дополнительные исследования.

Освещение в СМИ дало особенно плодотворный импульс связям с общественностью в отношении мРНК-вакцин.

За последний год для американцев было бы практически невозможно не заметить решение СМИ сделать вакцины основным повествованием о COVID, поспешив сделать это еще до того, как произошли какие-либо смерти, связанные с коронавирусом.

Наклонное освещение в средствах массовой информации дало особенно плодотворный импульс связям с общественностью по вакцинам на основе матричной РНК (мРНК), которые разрабатывались десятилетиями, но так и не были одобрены для использования человеком, помогая приблизить экспериментальную технологию к финишной черте.

Для сравнения, мРНК-вакцины отправляют свою химически синтезированную полезную нагрузку мРНК (в комплекте с инструкциями по производству шипованного белка) непосредственно в цитоплазму.

В декабрьском препринте о SARS-CoV-2 , подготовленном учеными из Гарвардского и Массачусетского технологического институтов (MIT), были сделаны выводы о диком коронавирусе, которые поднимают вопросы о том, как действует вирусная РНК.

По словам Корригана, выводы исследователей из Гарварда и Массачусетского технологического института также ставят предположения CDC о мРНК-вакцинах на более шаткую почву. Фактически, за месяц до появления препринта Гарварда-Массачусетского технологического института Корриган уже написал блог, в котором описал возможные механизмы и пути, с помощью которых мРНК-вакцины могут вызывать идентичный феномен.

Предварительные данные , приведенные исследователями Harvard-MIT показывает , что эндогенные ферменты обратной транскриптазы может способствовать обратной транскрипции РНК коронавируса и вызвать их интеграции в геном человека.

На самом деле, как долго синтетическая мРНК вакцин - и, следовательно, инструкции для клеток, чтобы они продолжали производить спайковый белок - сохраняются внутри клеток, остается открытым вопросом.

У него есть готовый и убедительный ответ:

В пресс-релизе от 10 марта, в котором говорилось, что мРНК-вакцины являются явными победителями гонки вакцин против COVID-19, отмечалось, что все крупные фармацевтические компании сейчас «тестируют технологию [мРНК], заключая лицензионные соглашения и / или сотрудничая с хорошо зарекомендовавшими себя компаниями, производящими РНК. ”

Вот та самая статья-препринт об исследовании учеными МТИ и Гарварда интеграции вирусной РНК в геном человека -

[ Нажмите, чтобы прочитать ]
PMID: 33330870 PMCID: PMC7743078 DOI: 10.1101 / 2020.12.12.422516

Вот цитаты из рецензии на нее с разбором от профессионала, озабоченного необратимыми последствиями этого процесса -

Новое исследование проливает свет на вопрос о том, может ли РНК-вакцина навсегда изменить ДНК
[ Нажмите, чтобы прочитать ]
.
В этой статье они демонстрируют, что:

1) Сегменты вирусной РНК SARS-CoV-2 могут интегрироваться в геномную ДНК человека.

2) Эта недавно приобретенная вирусная последовательность не молчит, что означает, что эти генетически модифицированные области геномной ДНК являются транскрипционно активными (ДНК преобразуется обратно в РНК).

3) Сегменты вирусной РНК SARS-CoV-2, ретроинтегрированные в геномную ДНК человека в культуре клеток. Эта ретроинтеграция в геномную ДНК пациентов с COVID-19 также косвенно подразумевается из обнаружения транскриптов химерной РНК в клетках, полученных от пациентов с COVID-19. Хотя их данные RNAseq предполагают, что у пациентов с COVID-19 происходят изменения генома, чтобы окончательно доказать эту точку зрения, следует провести ПЦР, секвенирование ДНК или Саузерн-блоттинг на очищенной геномной ДНК пациентов с COVID-19, чтобы окончательно доказать эту точку зрения. Это пробел, который необходимо устранить в ходе исследования. Однако данные in vitro по линиям клеток человека герметичны.

4) Эта вирусная ретроинтеграция РНК в ДНК может быть индуцирована эндогенными ретротранспозонами LINE-1, которые продуцируют активную обратную транскриптазу (ОТ), которая превращает РНК в ДНК. (У всех людей есть несколько копий ретротранспозонов LINE-1, находящихся в их геноме.) Частота ретроинтеграции вирусной РНК в ДНК положительно коррелирует с уровнями экспрессии LINE-1 в клетке.

5) Эти ретротранспозоны LINE-1 могут активироваться вирусной инфекцией SARS-CoV-2 или воздействием цитокинов на клетки, и это увеличивает вероятность ретроинтеграции.

Вместо того, чтобы подробно рассматривать все их результаты (вы можете сделать это, если хотите, прочитав их статью, приведенную ниже), я отвечу на большой вопрос, который у всех на уме: если вирус может это сделать, то почему меня это должно волновать? Что, если вакцина делает то же самое?

В-третьих, РНК в вакцине отличается от РНК, продуцируемой вирусом. РНК в вакцине создана искусственно.
Во-первых, он разработан, чтобы оставаться в ваших клетках гораздо дольше, чем обычно (РНК по своей природе нестабильна и быстро разлагается в клетке).
Во-вторых, он разработан таким образом, чтобы эффективно транслироваться в белок (они достигают этого путем оптимизации кодонов). Повышение стабильности РНК увеличивает вероятность того, что она будет интегрирована в вашу ДНК; и увеличение эффективности трансляции увеличивает количество белка, транслируемого с РНК, если он действительно включается в вашу ДНК в транскрипционно активную область вашего генома.

Теоретически это означает, что какие бы негативные эффекты ни были связаны с естественным процессом интеграции вирусной РНК / ДНК,эти отрицательные эффекты могут быть более частыми и более выраженными при использовании вакцины по сравнению с естественным вирусом.

А вот и пара 4-минутных презентаций от президента компании Модерна, рассказывающих о принципе работы их мРНК-препаратов

Все делается практически в открытую, людям рассказывают о том, что их генетическим аппаратом будут манипулировать, но они, кажется, не понимают услышанного. Понимают ли это медики и ученые? Конечно, многие из них периодически выступают с заявлениями, подобными этому, н-р, но публика и их не слышит, ведь предметная область слишком сложна для понимания -
см. видео тут
[ Нажмите, чтобы прочитать ]

Итого. Могут ли РНК-вакцины изменить ДНК вакцинируемого? По всей видимости, да, это весьма вероятно. Станут ли эти сведения достоянием гласности? Скорее всего, нет, ведь это вызовет еще большее недоверие населения к вакцинам, которые используются как инструмент установления тотального контроля над человечеством, а вовсе не как способ борьбы с "пандемией". Когда целью является генетическая трансформация человека, именно этот факт будет скрываться особенно тщательно, что мы и наблюдаем. Информация просачивается достаточно активно, она открыто обсуждается профессионалами, но недоступна широкой публике -

Между тем, по факту человечеству заявляют прямо о том, что намерены заняться его трансформацией и ссылаться на незнание не выйдет, ведь любой интересующийся мог получить информацию в открытом доступе, стоило лишь слегка поискать. Особенно странно безразличие большинства к факту планирующейся генетической трансформации с помощью мРНК-вакцин выглядит на фоне общего негативного отношения к ГМО-продуктам. А ведь в данном случае речь идет о превращении в ГМО самого человека.

Как вы относитесь к возможности генетической модификации человека мРНК-вакцинами и согласны ли сами на это?

Как работает ПЦР-анализ?

У каждого болезнетворного микроорганизма есть свой, уникальный порядок построения цепочки ДНК, поэтому его невозможно спутать с ДНК человека.

При проведении теста ПЦР используют фрагмент чужеродного генетического материала, добытый из образца, и размножают много раз с помощью белка-фермента. За несколько часов количество копий увеличивается в несколько миллиардов раз. Это позволяет получить такое количество ДНК, которого достаточно для успешного определения его природы.

В лабораториях используют определенный набор реактивов для каждого конкретного микроорганизма, поэтому пациентам назначают не общий ПЦР-анализ, а тест на конкретный микроорганизм (например, на вирус гепатита С).

Полимеразная цепная реакция проводится качественно и количественно. Качественный тест позволяет определить, есть ли в образце генетический материал микроорганизма (вируса или бактерии), который ищет врач. Количественный тест дает информацию о том, в каком количестве содержится материал.

Преимущества ПЦР-анализа

К достоинствам этого диагностического метода относят:

Универсальность. ПЦР-тест обнаруживает любые ДНК и РНК, даже в тех случаях, если другие диагностические методы не дали результата.
Эффективность. Полимеразная цепная реакция позволяет диагностировать некультивируемые, трудно культивируемые и латентно существующие формы патогенных микроорганизмов.
Высокую чувствительность. Даже если в исследуемом материале присутствует всего один фрагмент генетического материала возбудителя, тест все равно показывает его.
Высокую специфичность метода, достигающую 100%. В ходе диагностики выявляют уникальную последовательность нуклеотидов в цепочке ДНК, характерную только для конкретного патогенного микроорганизма, провоцирующего развитие заболевания.
Высокую скорость выполнения. Для установки реакции достаточно несколько часов. Пациент получает результаты анализа на следующий день после сдачи.

ПЦР-тест направлен на определение возбудителя заболевания, а не на реакцию на его проникновение со стороны организма.

Показания к проведению ПЦР-теста

Анализ проводят при инфекционных заболеваниях для определения природы их возбудителя. Также его назначают при:

необходимости точно установить конкретный болезнетворный микроорганизм;
диагностике лейкоза и других злокачественных новообразований;
диагностике некоторых генетически обусловленных заболеваний;
исследовании образцов биопсии, которые невозможно изучить с помощью других методов.

С помощью ПЦР-анализа выявляют различные заболевания:

инфекционные (ВИЧ, гепатит, ТОРЧ-инфекции и т.д.);
передающиеся половым путем (хламидии, микоплазмы, кандиды);
внутриутробные инфекции (вирусы краснухи, герпеса, токсоплазмы);
респираторные (в настоящее время ПЦР-тест является золотым стандартом в диагностике вируса Ковид-19);
генетические.

С помощью ПЦР можно провести тест на определение отцовства.

Типы ПЦР

Диагностика на основе полимеразной цепной реакции имеет несколько разновидностей. Она может быть:

инвертированной;
с обратной транскрипцией;
количественной;
вложенной;
ступенчатой.

Наиболее надежный метод — ПЦР в режиме реального времени. Это количественный или полуколичественный способ диагностики, который предусматривает постоянное наблюдение образца генетического материала датчиком. Последний регистрирует сигналы на каждом цикле реакции.

Подготовка к анализу

При подготовке к ПЦР-анализу нужно соблюдать несколько правил:

За 10-14 дней до назначенного теста прекратить прием любых препаратов и отказаться от проведения лечебных процедур, включая физиотерапевтические. Если прием лекарственных средств жизненно необходим, об этом нужно предупредить врача заранее.
В случае забора мазка на выявление заболеваний, передающихся половым путем, нужно в течение суток перед исследованием отказаться от спринцеваний, использования тампонов и лечебных суппозиториев, применения антисептических средств. Также в этот период необходимо воздерживаться от половых актов. За 2 часа до забора мазка нельзя мочиться.
Если выполняется забор мазка из зева, за 3 часа до анализа нельзя чистить зубы, пить, полоскать рот (даже простой водой).
За трое суток до сдачи материала на ПЦР-исследование нужно полностью отказаться от употребления алкоголя.
За двое суток до проведения теста нужно исключить повышенные физические нагрузки.

Материалы для ПЦР-анализа

В зависимости от направленности теста ПЦР, в качестве материала для исследования используют:

кровь (сыворотка или плазма);
соскобы эпителиальных клеток (с кожных покровов, слизистой оболочки уретры, цервикального канала);
различные биологические жидкости (околоплодная, суставная, спинномозговая жидкости, секрет предстательной железы);
мазок из зева;
различные биологические выделения (слюна, моча, мокрота);
биоптат (материал, полученный путем проведения биопсии).

Расшифровка результатов ПЦР-тестирования

Результат ПЦР-анализа либо положительный, либо отрицательный. Положительный указывает на то, что у человека присутствуют фрагменты ДНК возбудителя заболевания, то есть, что человек заражен и ему необходимо лечение. Отрицательный результат ПЦР-анализа свидетельствует об отсутствии следов ДНК патогена. В таком случае человек здоров.

В некоторых случаях ПЦР-тест дает положительный результат, хотя человек не ощущает недомогания и специфических симптомов заражения. Это значит, что заболевание выявлено на ранней стадии развития. Для уточнения диагноза назначают дополнительные исследования, а затем, с учетом их результата, начинают курс лечения.

Читайте также: