Фазовый контраст в микроскопе своими руками

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 15.09.2024

Метод фазово-контрастной микроскопии разработан для наблюдения за прозрачными объектами, он основан на преобразовании фазовых изменений, претерпеваемых световой волной при прохождении через объект, в видимые аплитудные с помощью определенного оптического устройства. Если в объектив обычного микроскопа вмонтировать специальный диск - фазовую пластинку с кольцом (получается путем напыления диска солями редких металлов толщиной в несколько десятых микрометра), а в конденсор - кольцевую диафрагму (непроницаемую для лучей света пластинку с прозрачной щелью в виде кольца), так чтобы через конденсор и объектив проходило лишь кольцо света, которое затем совмещается с кольцом фазовой пластинки объектива, то фазы проходящего светового луча сдвигаются (обычно на 1/4длины волны), фазовые изменения переходят в амплитудные, и препарат становится контрастным.

Метод применяют для исследования живых клеток микроорганизмов, контрастность которых достигается оптическим путем без вмешательства в физиологические процессы изучаемых объектов.

1. В каких случаях применяется фазово-контрастная микроскопия?

2. На чём основан метод фазово-контрастной микроскопии?

3. Чем отличается конструкция фазово-контрастного микроскопа от обычного светового?

4. Как устроена фазово-контрастная модель КФ-4?

Люминесцентная, или флуоресцентная, микроскопия

Некоторые биологические объекты способны при освещении коротковолновыми лучами (сине-фиолетовыми, ультрафиолетовыми) поглощать их и испускать лучи с более длинной волной. При этом клетки будут как бы светиться желто-зеленым или оранжевым светом. Это так называемая собственная, или первичная, люминесценция.

Нелюминесцирующие объекты можно обработать специальными флуорохромами (акридином желтым, акридином оранжевым, аурамином, примулином, тиофлавином, конго красным, тетрациклином, хинином) и также наблюдать люминесценцию.

Это уже будет наведенная, или вторичная, люминесценция.

Препараты, окрашенные флуорохромами, изучают в средах, не люминесцирующих под действием коротковолновых лучей: в воде, глицерине, вазелиновом масле или физиологическом растворе.

Оптическая схема люминесцентного микроскопа отличается от обычной источником света (можно использовать ртутную лампу, а если возможно возбуждение люминесценции объекта сине-фиолетовыми лучами, то и низковольтные лампы) и наличием на пути лучей двух светофильтров: синий светофильтр перед конденсором, пропускающий сине-фиолетовые лучи видимого спектра, и жёлтый светофильтр - в окуляре микроскопа, убирающий синие лучи, мешающие выявлению люминесценции.

Люминесцентная микроскопия по сравнению с обычной позволяет сочетать цветное изображение и контрастность объектов; изучать морфологию живых и мёртвых клеток микроорганизмов в питательных средах и тканях животных и растений; исследовать клеточные микроструктуры, избирательно поглощающие различные флуорохромы, которые являются при этом как бы специфическими цитохимическими индикаторами; определить функционально-морфологические изменения клеток; использовать флуорохромы при иммунологических реакциях и подсчёте бактерий в образцах с невысоким их содержанием.

Электронная микроскопия

По схеме строения электронный микроскоп аналогичен световому, но освещение объекта обеспечивает не луч света, а поток электронов от вольфрамовой нити, нагреваемой электрическим током.

Разрешающая способность современных электронных микроскопов – 0,2-0,4 нм, рабочее увеличение в среднем – 100 000 раз.

Трансмиссионный электронный микроскоп.

Трансмиссионный (просвечивающий, пропускающий электроны сквозь объект) микроскоп широко применяют в биологических исследованиях.

Каждый электронный микроскоп состоит из электронной пушки (источник электронов); электромагнитных катушек, выполняющих роль конденсорной, объективной и проекционной линз предметного столика; экрана для изображения и окуляра. Для работы микроскопа необходим вакуумный насос, т.к. движение электронов возможно только в вакууме. Электроны в трансмиссионном микроскопе движутся по такому же пути, как и лучи света в световом микроскопе.

Изображение объекта можно сфотографировать, если заменить флуоресцирующий экран (металлическую пластину, покрытую тонким слоем сульфида цинкаили сульфида цинка с селенидом кадмия) фотопластинкой.

Препараты для электронно-микроскопических исследований помещают на специальные сетки, на которые нанесена тончайшая плёнка (подложка). Общая толщина препарата и подложки не должна превышать 0,25 мкм.

Контрастность объекта обеспечивается напылением объекта тяжёлыми металлами (хромом, золотом, палладием) или обработкой контрастирующими веществами типа фосфорно-вольфрамовой кислоты и уранилацетата.

Сканирующий или растровый электронный микроскоп. Даёт объёмное почти трёхмерное изображение исследуемого объекта. В сканирующих микроскопах подвижный тонкий электронный луч очень быстро и последовательно обегает поверхность исследуемого образца по квадратному растру и передаёт полученную информацию на электронно-лучевую трубку, покрытую люминофором, светящимся под действием электронов.

Глубина фокуса сканирующего микроскопа достигает нескольких миллиметров; пределы полезного увеличения 10-50 тыс. раз, разрешающая способность меньше, чем у трансмиссионных.

Препараты для сканирующего микроскопа подвергают специальной обработке, основная цель которой - обезвоживание объекта без нарушения, (сморщивания) поверхности структур. Затем препарат покрывают тонким слоем сплава золота или платины, что делает поверхность образца электропроводной и позволяет избежать накопления электрического заряда, который может снизить разрешающую способность микроскопа.

При работе с электронным микроскопом следует строго соблюдать правила техники безопасности.

Задание:

Зарисовать схему устройства электронного микроскопа, пользуясь рис. 2 из цветного буклета.

Контрольные вопросы:

1. В чём преимущества люминесцентной микроскопии, на чём она основана?

2. Что означает первичная люминесценция?

3. Как можно получить наведенную или вторичную люминесценцию?

4. Какова разрешающая способность и рабочее увеличение современных электронных микроскопов?

5. На каком физическом явлении основана электронная микроскопия?

6. Назовите два типа электронных микроскопов.

7. Из каких узлов состоит электронный микроскоп?

8. В чём особенности пробоподготовки в трансмиссионном микроскопе?

9. В чём преимущества сканирующего или растрового микроскопирования?

10. Как готовят препараты для сканирующего микроскопа?

© 2014-2022 — Студопедия.Нет — Информационный студенческий ресурс. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав (0.005)

Фазовый микроскоп или фазово-контрастный микроскоп – прибор, поддерживающий функцию микроскопирования неокрашенных микроорганизмов или клеток с получением чёткого и контрастного их изображения.

Это достигается путем включения в конфигурацию микроскопа конденсора со специальными фазовыми вставками, подходящими под определенное увеличение объектива, и объективов с фазовыми кольцами. Сам метод основывается на разности оптической плотности разных частей изучаемого объекта, а также среды, в которую он помещен.

Свет, прошедший через фазовую вставку конденсора освещает препарат. Весь пучок света поступает в объектив в место, где расположено нанесенное на стекло фазовое, придающее свету фазовое смещение. Если в препарате содержатся объекты, имеющие оптическую плотность, отличную от среды, изменяющие направление луча (например, клетки, их ядра), то попадающий на образец прямой луч света отклоняется по траектории. Этот свет не проходит сквозь фазовое кольцо, не ослабляется и не задерживается. Эти лучи с различными фазами, отсеченные фазовым кольцом (дифрагированные), объединяются (ослабляются или усиливаются путем наложения фаз) линзой объектива и формируют промежуточное изображение. Таким образом, разность фаз превращается в разницу интенсивностей лучей, которую может регистрировать глаз наблюдателя.

Фазово-контрастная микроскопия необходима там, где нет возможности окрашивать малоконтрастные биологические объекты, особенно живые, что привело бы к их необратимым изменениям и гибели, а также изучать микробиологические образцы в динамике, на различных стадиях жизненного цикла.

Метод светлого поля в проходящем свете применяется при исследовании прозрачных препаратов, у которых различные участки структуры по-разному поглощают свет (тонкие окрашенные срезы животных и растительных тканей, тонкие шлифы минералов и другие).
Пучок лучей из осветительной системы проходит препарат и объектив и дает равномерно освещенное поле в плоскости изображения. Элементы структуры препарата частично поглощают и отклоняют падающий на них свет, что и обусловливает появление изображения.

Метод может быть полезен и при наблюдении непоглащающих объектов, но лишь в том случае, если они рассеивают освещающий пучок настолько сильно, что значительная часть его не попадает в объектив.
Метод светлого поля в отраженном свете применяется для наблюдения непрозрачных объектов, к примеру, травленых шлифов металлов, биологических тканей и различных минералов. Освещение препарата производится сверху, через объектив, который одновременно выполняет и роль осветительной системы.
Изображение, как и при проходящем свете, создается за счет того, что разные участки препарата неодинаково отклоняют падающий на них свет, а отраженные лучи имеют различную интенсивность.

2. Темное поле

Темнопольная микроскопия основана на способности микроорганизмов сильно рассеивать свет. Для темнопольнои микроскопии пользуются обычными объективами и специальными темнопольными конденсорами.
Основная особенность темнопольных конденсоров заключается в том, что центральная часть у них затемнена и прямые лучи от осветителя в объектив микроскопа не попадают. Объект освещается косыми боковыми лучами и в объектив микроскопа попадают только лучи, рассеянные частицами, находящимися в препарате. Темнопольная микроскопия основана на эффекте Тиндаля, известным примером которого служит обнаружение пылинок в воздухе при освещении их узким лучом солнечного света.
Чтобы в объектив не попадали прямые лучи от осветителя, апертура объектива должна быть меньше, чем апертура конденсора. Для уменьшения апертуры в обычный объектив помещают диафрагму или пользуются специальными объективами, снабженными ирисовой диафрагмой.
При темнопольной микроскопии микроорганизмы выглядят ярко светящимися на черном фоне. При этом способе микроскопии могут быть обнаружены мельчайшие микроорганизмы, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности микроскопа. Однако темнопольная микроскопия позволяет увидеть только контуры объекта, но не дает возможности изучить внутреннюю структуру. С помощью темнопольнои микроскопии изучают препараты типа раздавленная "капля". Предметные стекла должны быть не толще 1,1-1,2 мм, покровные 0,17 мм, без царапин и загрязнений.
При приготовлении препарата следует избегать наличия пузырьков и крупных частиц (эти дефекты будут видны ярко святящимися и не позволят наблюдать препарат). Для темнопольной применяют более мощные осветители и максимальный накал лампы.
Настройка темнопольного освещения в основном заключается в следующем:
1) устанавливают свет по Келеру;
2) заменяют светлопольный конденсор темнопольным;
3) на верхнюю линзу конденсора наносят иммерсионное масло или дистиллированную воду;
4) поднимают конденсор до соприкосновения с нижней поверхностью предметного стекла;
5) объектив малого увеличения фокусируют на препарат;
6) с помощью центрировочных винтов переводят в центр поля зрения светлое пятно (иногда имеющее затемненный центральный участок);
7) поднимая и опуская конденсор, добиваются исчезновения затемненного центрального участка и получения равномерно освещенного светлого пятна.
Если этого сделать не удается, то надо проверить толщину предметного стекла (обычно такое явление наблюдается при использовании слишком толстых предметных стекол - конус света фокусируется в толще стекла).
После правильной настройки света устанавливают объектив нужного увеличения и исследуют препарат.

3. Поляризация

Метод исследования в поляризованных лучах применяется в проходящем и в отраженном свете для так называемых анизотропных объектов, обладающих двойным луче преломлением или отражением.
Такими объектами являются многие минералы, угли, некоторые животные и растительные ткани и клетки, искусственные и естественные волокна. При исследовании анизотропных препаратов к обычной схеме микроскопа перед осветительной системой добавляют поляризатор, а после объектива - анализатор, находящиеся в скрещенном либо параллельном положении относительно друг друга.
При скрещенных поляризаторе и анализаторе в темном поле зрения микроскопа видны темные, светлые или окрашенные анизотропные элементы объекта. Вид этих элементов зависит от положения объекта относительно плоскости поляризации и от величины двойного лучепреломления.
Более точное определение оптических данных объекта делается с помощью различных компенсаторов (неподвижных кристаллических пластинок, подвижных клиньев и пластинок).

4. Фазовый контраст

При микроскопии неокрашенных микроорганизмов, отличающихся от окружающей среды только по показателю преломления, изменения интенсивности света (амплитуды) не происходит, а изменяется только фаза прошедших световых волн. Поэтому глаз этих изменений заметить не может и наблюдаемые объекты выглядят малоконтрастными, прозрачными.
Для наблюдения таких объектов используют фазово-контрастную микроскопию, основанную на превращении невидимых фазовых изменений, вносимых объектом, в амплитудные, различимые глазом.
Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе и состоит из:
1) набора объективов со специальными фазовым пластинками;
2) конденсора с поворачивающимся диском. В нем установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов;
3) вспомогательного телескопа для настройки фазового контраста.
Настройка фазового контраста заключается в следующем:
1) заменяют объективы и конденсор микроскопа на фазовые (обозначенные буквами Ph) ;
2) устанавливают объектив малого увеличения. Отверстие в диске конденсора должно быть без кольцевой диафрагмы (обозначенной цифрой "0");
3) настраивают свет по Келеру;
4) выбирают фазовый объектив соответствующего увеличения и фокусируют его на препарат;
5) поворачивают диск конденсора и устанавливают соответствующую объективу кольцевую диафрагму;
6) вынимают из тубуса окуляр и вставляют на его место вспомогательный телескоп. Настраивают его так, чтобы были резко видны фазовая пластинка (в виде темного кольца) и кольцевая диафрагма (в виде светлого кольца того же диаметра). С помощью регулировочных винтов на конденсоре совмещают эти кольца. Вынимают вспомогательный телескоп и вновь устанавливают окуляр.
Благодаря применению этого способа микроскопии контраст живых неокрашенных микроорганизмов резко увеличивается и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый контраст).
Фазово-контрастная микроскопия применяется также для изучения клеток культуры ткани, наблюдения действия различных вирусов на клетки и т. п. В этих случаях часто применяют биологические микроскопы с обратным расположением оптики - инвертированные микроскопы. У таких микроскопов объективы расположены снизу, а конденсор - сверху.

5. Флуоресценция (люминесценция)

Флуоресцентная (люминесцентная) микроскопия основана на способности некоторых веществ люминесцировать, т. е. светиться при освещении невидимым ультрафиолетовым или синим светом. Цвет люминесценции смещен в более длинноволновую часть спектра по сравнению с возбуждающим ее светом (правило Стокса).
При возбуждении люминесценции синим светом цвет ее может быть от зеленого до красного, если люминесценция возбуждается ультрафиолетовым излучением, то свечение может быть в любой части видимого спектра. Эта особенность люминесценции позволяет, используя специальные светофильтры, поглощающие возбуждающий свет, наблюдать сравнительно слабое люминесцентное свечение.
Устройство флуоресцентного микроскопа и правила работы с ним отличаются от обычного светового микроскопа в основном следующим:
1. Наличие мощного источника света в осветителе, излучающего преимущественно в коротковолновой (ультрафиолетовой, синей) части спектра (ртутно-кварцевая лампа или галогенная кварцевая лампа).
2. Наличие системы светофильтров:
• возбуждающие светофильтры пропускают только ту часть спектра, которая возбуждает люминесценцию;
• теплозащитный светофильтр защищает от перегрева другие светофильтры, препарат и оптику флуоресцентного микроскопа;
• "запирающие" светофильтры расположены между окуляром. Эти светофильтры поглощают возбуждающее излучение и пропускают свет люминесценции от препарата к глазу наблюдателя.
Способ освещения препаратов для возбуждения люминесценции заключается в том, что препарат освещают светом, падающим на него через объектив. Благодаря этому освещенность увеличивается при использовании объектов, имеющих большую числовую апертуру, т. е. тех, которые используются для изучения микроорганизмов.
Важную роль при этом способе освещения играет специальная интерференционная светоделительная пластинка, направляющая свет в объектив. Она представляет собой полупрозрачное зеркало, которое избирательно отражает и направляет в объектив часть спектра, которая возбуждает люминесценцию, а пропускает в окуляр свет люминесценции.
Оптика объективов флуоресцентного микроскопа изготавливается из нелюминесцирующих сортов оптического стекла и склеивается специальным нелюминесцирующим клеем. При работе с объективами масляной иммерсии используется нелюминесцирующее иммерсионное масло.
Поскольку большинство микроорганизмов не обладают собственной люминесценцией существует несколько способов их обработки для наблюдения в флуоресцентном микроскопе. Прежде всего, это флуорохромирование - окрашивание сильно разведенными (до нескольких микрограмм/мл) растворами флуоресцирующих красителей (флуорохромов). Флуоресцентная микроскопия по сравнению с обычной позволяет:
• сочетать цветное изображение и контрастность объектов;
• изучать морфологию живых и мертвых клеток микроорганизмов в питательных средах и тканях животных и растений;
• исследовать клеточные микроструктуры, избирательно поглощающие различные флуорохромы, являющиеся при этом специфическими цитохимическими индикаторами;
• определять функционально-морфологические изменения клеток;
• использовать флуорохромы при иммунологических реакциях и подсчете бактерий в образцах с невысоким их содержанием.

6. Хоффмановский контраст

Хоффмановский контраст (ХК) представляет собой метод косого освещения, повышающий контраст в окрашенных и неокрашенных препаратах за счет образования градиента оптических фаз. ХК пoзвoляeт нaблюдaть тpexмepнoe изoбpaжeниe живыx oбpaзцoв в плacтикoвыx чaшкax c выcoкoй чeткocтью, чтo дaeт pacшиpeнныe вoзмoжнocти для peшeния нaучныx и cпeциaльныx мeдицинcкиx зaдaч. За счет использования бoльшиих paбoчих paccтoяний и выcoких чиcлoвых aпepтуp метод позволяет тoчнo oтcлeживaть движeние в пoлe зpeния, нaпpимep, пpи проведении микроманипуляций.

Дpугиe иccлeдoвaния - тaкиe, кaк элeктpoфизиoлoгия, вспомогательные репродуктивные технологии и ЭКО - тpeбуют нe тoлькo кoндeнcopoв, нo и oбъeктивoв c бoльшим paбoчим paccтoяниeм. При иccлeдoвaнии тoлcтыx oбpaзцoв ХК пoмoгaeт peшить зaдaчу пocлoйнoгo изучeния oбpaзцa путeм выбopa пocлeдoвaтeльнocти фoкaльныx плaнoв. Пpи этoм кaждый вepxний фoкaльный плaн нe нeceт инфopмaции о нижeлeжaщeм плaне.
ХК мoжeт быть пpимeнeн нa микpocкoпe c флуopecцeнтным ocвeтитeлeм. Изучeниe мopфoлoгии c пpимeнeниeм флуopecцeнции или бeз тaкoвoй вoзмoжнo бeз cмeны oбъeктивoв и oбpaзцa. Стоит отметить преимущество Хоффмановского контраста по сравнению с Фазовым контрастом.
Известно, что Фaзoвoму кoнтpacту пpиcущ эффeкт Гaлo - появление светящегося ореола по контуру изображения объекта. B peзультaтe Bы мoжeтe пoтepять вaжную инфopмaцию. XК нe дaeт Гaлo, чтo пoзвoляeт лeгкo oпpeдeлять cвoйcтвa кpaeвыx cтpуктуp, нaпpимep, тoчнo зaмepять углы или расстояния.

7. ДИК (дифференциально-интерференционный контраст)

ДИК (дифференциально-интерференционный контраст) - является прекрасным механизмом для создания контраста в прозрачных препаратах. Микроскопия с ДИК представляет собой интерференционную систему с расщеплением пучка света, при которой контрольный пучок отклоняется на небольшое расстояние, обычно меньшее, чем диаметр дифракционного кружка.
С помощью данного метода получается монохроматическое оттененное изображение, которое отображает градиент оптических путей как высоко-, так и низкопространственных частот, присутствующих в препарате.
Те участки препарата, при прохождении через которые оптические пути удлиняются по отношению к контрольному пучку, выглядят ярче или темнее, тогда как участки, между которыми различия меньше, обладают противоположным контрастом.
Чем круче становится градиент оптических пучков, тем резче контраст изображения

Фазово-контрастная микроскопия широко распространена при исследовании биологических образцов, в которых части объекта отличаются незначительно по поглощению света , но по показателю преломления. Метод фазового контраста был разработан в 1932 году голландским физиком Фрицем Цернике и внедрен в микроскопическую практику в 1941 году Йенской Карл-Цейсс-Верке . В 1953 году Зернике получил Нобелевскую премию по физике за свое открытие .

Контраст в световой микроскопии

Видимость деталей на изображении зависит от разрешения и контрастности изображения. В частности, световая микроскопия биологических объектов во многих случаях ухудшается из-за плохой контрастности получаемых изображений.

Амплитудные и фазовые объекты

Объекты амплитуды

При просмотре в ярком поле отчетливо видны только области изображения, которые в определенной степени поглощают свет по сравнению с окружающей средой. Либо за счет общего поглощения света (затемнение), либо за счет спектрально специфического поглощения света (естественные цвета). Такие объекты также называют объектами амплитуды.

Фазовые объекты

Более или менее четкие и бесцветные объекты мало влияют на амплитуду падающего света и кажутся видимыми только в том случае, если, в порядке исключения, они имеют очень сильную разницу в показателе преломления по сравнению с окружающей средой. Как правило, такие объекты имеют очень плохую контрастность, поскольку человеческий глаз не может воспринимать разность фаз как таковую. Поскольку такие объекты, в отличие от объектов с амплитудой, не вызывают значительной разницы в амплитуде падающего света, а только различаются по фазе, их также называют фазовыми объектами.

Способы увеличения контраста

Есть несколько способов увеличить контраст. Например, отдельные предметы или их компоненты специально окрашиваются красителями . Другой способ - уменьшить засветку за счет диафрагмы осветительного прибора ( конденсатор заужен). В результате части объекта с разными показателями преломления отображаются с большей контрастностью. Однако этот метод имеет серьезный недостаток, заключающийся в том, что разрешение изображения значительно снижается, поскольку разрешение микроскопа зависит от числовой апертуры освещения объекта. Кроме того, искусственное окрашивание затрудняет отображение живого биологического материала, поскольку многие клетки погибают в результате действия красителя.

Принцип метода фазового контраста

Метод фазового контраста от Frits Zernike использует различия в показателе преломления и толщине объекта для создания контраста светлого и темного без значительного уменьшения апертуры освещения и, следовательно, разрешения микроскопа. Поскольку свет распространяется с разной скоростью в средах с разными показателями преломления, существует разница фаз при прохождении через объект, который оптически более плотный, чем его окружение, по сравнению со светом, который не проходит через этот объект.

Чтобы иметь возможность представить этот фазовый сдвиг в разностях яркости, в фазово-контрастный микроскоп встроены фазовое кольцо в объективе и кольцевая диафрагма в конденсорной линзе . Кольцевая диафрагма ограничивает падение света на образец определенным углом падения. Если под микроскопом нет образца, весь фоновый свет, падающий через кольцевую диафрагму, попадает на фазовое кольцо. Он состоит из материала, который ослабляет свет и в то же время сдвигает его фазу на 90 °.

Однако, если препарат, например образец с прозрачными ячейками, попадает на путь луча, свет частично отклоняется от структур ячеек. Однако, в отличие от недифрагированного света, этот дифрагированный объектный свет преимущественно не проходит через фазовое кольцо и, соответственно, не подвергается влиянию. Однако дифракция в образце также вызывает фазовый сдвиг в зависимости от показателя преломления.

В плоскости изображения теперь есть интерференция между фоном и светом объекта. Для достижения максимально возможного контраста фазовый сдвиг фонового света в фазовом кольце должен быть установлен таким образом, чтобы фоновый свет ослаблял свет объекта в максимально возможной степени, когда он мешал свету объекта. Поэтому фазовое кольцо в линзе должно иметь размеры приблизительно в соответствии с наиболее распространенными показателями преломления и толщиной наблюдаемых объектов. В результате объект теперь в основном выглядит темным на фоне. Это называется положительным фазовым контрастом . В случае объектов с особо высоким показателем преломления ( например , эндоспорами из бактерий ), изменения контраста и они отображаются ярче , чем фон.

В методе, который используется редко, фазовое кольцо рассчитывается таким образом, что контраст становится обратным даже для обычных объектов, то есть они кажутся светлыми на более темном фоне; это известно как отрицательный фазовый контраст .

При использовании метода фазового контраста разрешение микроскопа не улучшается сверх дифракционного предела .

Сравнение различных методов микроскопии на образце папиросной бумаги .

Фазовый контраст, контраст создается за счет интерференции световых волн разной фазы после прохождения через объект.

Читайте также: