Как сделать разведение в 10 раз

Обновлено: 01.07.2024

Разводят исходную разбавленную слюну водой в пробирках в 10, 20, 50, 100 раз. Берут четыре пробирки и вносят в каждую 1 мл одного из полученных разведений слюны. В пробирки из бюретки добавляют по 4 мл раствора крах­мала, быстро помещают их в водяную баню при температуре 38 °С и засекают время начала реакции.

Через каждые 1-2 мин отбирают по 2 капли жидкости из каждой пробы и приливают к ним по 1 капле раствора йода в иодиде калия. Вначале пробы дают синее, затем красно-фиолетовое и, наконец, красное окрашивание.

Отмечают с точностью до 0,5 мин время от начала опыта до появления в каждой из четырех пробирок красного окрашивания - стадия образования эритродекстринов из крахмала.

Оформление работы: результаты изобразить графически, откладывая по оси ординат V - скорость реакции (величина, обратная времени образования эритродекстринов), а по оси абсцисс С - относительную концентрацию амила­зы (разведение). Сделать вывод о зависимости скорости реакции от концентра­ции фермента и сравнить с той же зависимостью для небиологических катали­заторов.

Зависимость скорости ферментативной реакции от температуры

Метод основан на определении скорости гидролиза а-амилазой слюны крахмала в зависимости от температуры.

Ход работы

В пять пробирок отмеривают по 10 капель растворов фосфатно- щтратного буфера со следующими значениями pH: 5,6; 6,4; 6,8; 7,2; 8,0. При­бавляют во все пробы по 5 капель разведенной в 10 раз слюны и по 10 капель раствора крахмала и ставят пробирки на водяную баню при температуре 38 °С. 1ерез 1-2 мин отбирают по 1 капле исследуемого раствора и капают на 1 каплю раствора йода в иодиде калия. Отмечают время (стадия образования эритродектринов) в каждой из пяти проб.

Фермент Субстрат Окрашивание йодом Температура, ▫С Окрашивание после нагревания
Вода крахмал Темно-зеленый Сине-фиолетовый, красный осадок
Слюна крахмал желтый Коричнево-оранжевый, красный осадок
HCl крахмал коричневый Оранжевый, красный осадок

Вывод: Была изучена кинетика ферментативных реакций. Использование методов качественного анализа субстратов и продуктов реакции позволили выявить присутствие фермента в биологическом материале.

Приготовление разведений. Молоко и молочные продукты обычно содержат большое количество микробов (от десятков тысяч до миллиардов в 1 мл или 1 г). Поэтому перед посевом производят разведения исследуемого материала в физиологическом растворе. Чтобы получить разведение в 10 раз (первое разведение), пробирку с исследуемым материалом помещают в наклонном положении в левую руку между большим и указательным, а пробирку с физиологическим раствором — между указательным и средним пальцами.

Пробки из пробирок вынимают и помещают одну между средним и безымянным пальцами, а вторую — между безымянным и мизинцем левой руки. Затем, обжигая над пламенем горелки концы пробирок, вводят стерильную пипетку в пробирку с исследуемым материалом (например, молоком, сливками), набирают 1 мл его и переносят в пробирку со стерильным физиологическим раствором. Жидкость выдувают, несколько раз набирают раствор и таким образом промывают пипетку. После этого пробирки закрывают пробками, которые предварительно обжигают на огне.

Для приготовления следующего разведения берут новую стерильную пипетку, набирают 1 мл из пробирки с первым разведением и переносят его во вторую пробирку со стерильным физиологическим раствором. Получают разведение в 100 раз (второе разведение) и так далее.

Если нужно сделать разведения творога, то взвешивают 10 г продукта на стерильном часовом стекле, тщательно растирают его в профламбированной ступке, постепенно добавляя 90 мл стерильного физиологического раствора, подогретого до температуры 40—45°С, и получают разведение в 10 раз (первое разведение). Затем делают все последующие разведения.

Масло перед исследованием расплавляют в водяной бане при температуре 40—50°С, из расплавленного масла отбирают стерильной пипеткой I мл и далее делают разведения, как указано выше.

При контроле сыра из разных мест его щупом вырезают кусочки и отвешивают на профламбированном часовом стекле пробу массой 1 г. Взятую навеску сыра тщательно растирают в профламбированной ступке, прикрытой стерильной крышкой от чашки Петри, постепенно добавляя 9 мл стерильного физиологического раствора или 2 %-ного раствора лимоннокислого натрия, подогретого до температуры 45°С, и получают разведение в 10 раз (первое разведение). Затем делают последующие разведения.

Перед приготовлением разведений кисломолочных напитков (кефира, ряженки, простокваши) и заквасок для посева на среду Кесслер проводят предварительную нейтрализацию образцов до pH 6,8—7. Для этого отбирают стерильной пипеткой 10 мл исследуемого продукта или закваски в стерильную пробирку или колбочку и добавляют 1 мл 10%-ного раствора питьевой соды.

Чашечный метод. Он позволяет определить количество микробов в продукте по количеству выросших на среде колоний. При этом предполагают, что каждая колония образуется из одной клетки. При посеве чашечным методом разведения делают с таким расчетом, чтобы последнее из них содержало десятки клеток в 1 мл. Для посева в чашки Петри используют три последние разведения, рассчитывая, что в чашке с меньшим разведением вырастет приблизительно 1000 колоний, с предпоследним 100, а с последним—10 колоний. Берут три стерильных чашки Петри и в каждую из них вносят стерильной пипеткой по 1 мл выбранных разведений, слегка приоткрывая крышку и выдувая содержимое пипетки. После внесения в чашки Петри исследуемый материал заливают расплавленной и охлажденной до температуры 45—50 °С средой. Агар тщательно перемешивают, вращая пробирку между ладонями. Вынув пробку, обжигают края пробирки и быстро выливают агар, осторожно приподняв крышку. Питательную среду легкими вращательными движениями распределяют по дну чашки и дают ей застыть. После этого чашки с агаром перевертывают вверх дном и помещают в термостат, где их выдерживают при определенной температуре в течение установленного для
данного вида анализа времени. После этого подсчитывают количество колоний в каждой чашке, затем с учетом сделанного разведения пересчитывают на 1 г продукта и определяют среднее арифметическое от общего количества засеянных чашек.

Метод предельных разведений. С его помощью устанавливают наименьшее количество продукта, в котором содержится исследуемый организм. Для этого делают разведения с таким расчетом, чтобы в последних разведениях не содержалось ни одной клетки микробов. Засевая из всех сделанных разведений по 1 мл в жидкую питательную среду и выдерживая в дальнейшем посевы при оптимальной температуре, находят предел — то разведение, в которое еше попали микроорганизмы. Среда, в которую был внесен материал из разведений, не содержавших микробов, остается без изменений.

По разведению, в котором еще отмечен рост микроорганизмов, можно грубо подсчитать их количество в исследуемом продукте. Так, если рост наблюдался в шестом разведении, количество микроорганизмов в продукте можно считать грубо — единицы миллионов клеток в 1 мл или 1 г. Подсчитать несколько точнее количество бактерий по данным, полученным методом предельных разведений, можно с помощью специальной таблицы. Однако даже такой подсчет дает лишь ориентировочное представление о содержании микроорганизмов в продукте.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Один к десяти (1:10) значит взять одну часть чего-то и смешать с десятью частями чего-то. Без разницы, объем, масса, штуки. Это должно быть указано, но отдельно или не суть важно, как при подкислении по каплям или мытье посуды. А вот разбавить в 10 раз, значит взять один к девяти (1:9). 22 апр. 2017 г.

Часто задаваемые вопросы:

Какая трава вытесняет пырей?

Более щадящий способ для здоровья — перепашка участка и посев семян ржи. Рожь хорошо вытесняет пырей: подросшие злаки нужно скосить и заделать в почву.30 мар. 2021 г.

Можно ли использовать гидрокортизон при ячмене?

При наружном ячмене можно применять глазные мази с антибиотиками, например, эритромицин, тетрациклин или гидрокортизон, но их эффективность в ускорении восстановительного процесса не доказана, а при внутреннем ячмене они и вовсе бесполезны.22 янв. 2020 г.

Можно ли использовать шампиньоны после заморозки?

Замораживать шампиньоны можно не только в свежем виде, но и после прохождения термической обработки. В качестве последней может выступать варка, бланширование или жарка продуктов. Каждый из способов имеет свои преимущества и особенности.27 мар. 2019 г.

Когда можно обрезать макушки у малины?

Обычно весеннюю обрезку малины проводят в конце марта – апреле. Это зависит от погодных условий. Необходимо, чтобы снег уже растаял, но земля еще не успела прогреться. В это время вырезают все ослабленные, подмерзшие, поврежденные и плохо развивающиеся побеги.

Когда можно сеять огурцы в июле 2021?

Согласно Лунному календарю для посева огурцов в этом 2021 году благоприятные дни: 8 (после 3 часов дня), 9, 18, 19, 26, 27, 28 (до часу дня) июля. Сеять и сажать во второй месяц лета не рекомендуется 10, 24, 25 числа.

Чем мульчировать жимолость?

Жимолость влаголюбива. Хорошо отзывается на мульчирование почвы под кустами, благодаря которой сохраняется влага. Приствольный круг можно мульчировать скошенной травой, торфом или перегноем. Такая мульча помимо прочего служит хорошим удобрением.27 дек. 2013 г.

Как обрабатывать деревья селитрой?

Раствор составляют в пропорции 500–600 г мочевины (аммиачной селитры – 700 г) на 10 литров воды. Обрабатывают как кроны деревьев, так и обязательно приствольные круги. При этом опрыскивании в почву одновременно привносится азот.24 апр. 2015 г.

Какую температуру выдерживает Эустома?

Прорастают семена обычно через 10-14 дней. После появления всходов кассеты размещают в хорошо вентилируемом помещении, температуру снижают до 15…20°С. Самое важное в этот период — не допускать повышения температуры ночью более 22°С, иначе у сеянцев образуется розетка.

Какие заболевания лечит Берёзовый дёготь?

Березовый деготь, содержащий большое количество фенолов, является сильным антисептическим (противомикробным), инсектицидным и местнораздражающим средством и применяется при кожных заболеваниях: экземе, чешуйчатом лишае, чесотке, при различных сыпях и язвах, ожогах и гнойных ранах.

Разбавление растворов — уменьшение концентрации химического вещества в растворе добавлением растворителя или смешиванием с менее концентрированным раствором. При разбавлении сохраняется количество растворенного вещества.

Введите значения концентрации раствора, желаемой концентрации и необходимого объема в калькулятор, чтобы получить V1.

Калькулятор разбавления концентрированного химического вещества.

Формула разбавления растворов

где,

Пример разбавления

Концентрация раствора составляет 22 фемтомоляр, необходимая концентрация раствора 12 фемтомоляр и желаемый объем 11 микролитров, найти необходимый объем.

Читайте также: