Как сделать мясо пептонный бульон
Добавил пользователь Евгений Кузнецов Обновлено: 04.10.2024
Рецепт 61. Мясопептонный агар. МПА применяют для выращивания неприхотливых микроорганизмов и как основу специальных сред для культивирования более требовательных микробов (сывороточного, кровяного, асцитического агара и др.)
Пептон — 10,0-20,0 г
Натрия хлорид — 5,0 г
Агар — 10,0-20,0 г
Вода мясная — 1000 мл
Смесь пептона, хлорида натрия и мясной воды кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения ингредиентов. Бульон фильтруют, устанавливают pH и добавляют измельченный агар (в зависимости от качества агара и назначения среды). Затем среду кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. При помутнении среды ее просветляют одним из известных способов. Приготовленную среду разливают в пробирки или во флаконы, стерилизуют в автоклаве при 121 °С в течение 20 мин.
Рецепт 62. Питательный бульон (HiMedia, Nutrient Broth, Cat. M002):
Пептон — 5,0 г
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0 г
Экстракт говяжий — 1,5 г
Экстракт дрожжевой — 1,5 г
pH 7,4(±0,2)
Суспендируют 13 г сухой смеси в 1000 мл дистиллированной воды. Кипятят до полного растворения внесенных ингредиентов. Стерилизуют при 121 °С в течение 15 мин.
Среду используют для выращивания неприхотливых микробов. Добавление крови, сыворотки и других ингредиентов делает ее пригодной для роста требовательных микроорганизмов.
Рецепт 63. Питательный бульон (HiMedia, Nutrient agar, Cat. M001). Питательный агар рекомендуют использовать для выращивания широкого спектра микроорганизмов, не требующих специальных питательных добавок.
Пептон — 5,0 г
Натрия хлорид — 5,0 г
Экстракт говяжий — 1,5 г
Экстракт дрожжевой — 1,5 г
Агар — 15,0 г
pH 7,4 (±0,2)
Суспендируют 28 г сухой смеси в 1000 мл дистиллированной воды. Кипятят при постоянном помешивании до полного растворения внесенных ингредиентов. Стерилизуют при 121 °С в течение 15 мин.
Описание презентации Простые питательные среды • Мясо-пептонный бульон (МПБ) по слайдам
Простые питательные среды • Мясо-пептонный бульон (МПБ) является белковой основой всех сред. Готовят на мясной воде с добавлением готового пептона. Пептон – продукт неполного переваривания (гидролиза) белка, используется как источник азота и углерода. • Мясо-пептонный агар (МПА) – получают путём добавления к МПБ 1, 5 – 3% a г ap — a г apa. Агар-агар – продукт из морских водорослей, содержит высокомолекулярные полисахариды
Селективные питательные среды стимулируют рост одних микробов и угнетают рост других (за счет добавления в среду определённых компонентов). Так как в этих средах патогенные бактерии размножаются и накапливаются, их называют также средами обогащения. Например, среда Мюллера служит для накопления сальмонелл. К питательной среде добавляют мел, раствор Люголя и гипосульфит натрия. При взаимодействии этих веществ образуется тетратионат натрия, который угнетает рост кишечных палочек, но создает благоприятные условия для размножения сальмонелл.
Дифференциально-диагностич еские среды • позволяют отличить один вид микроба от другого на основании разной биохимической активности бактерий. • В состав дифференциально-диагностических сред входят : — основная питательная среда , обеспечивающая размножение бактерий, — определенный химический субстрат , различное отношение к которому является диагностическим признаком, — индикатор , изменение цвета которого свидетельствует о расщеплении субстрата и образовании конечных продуктов.
Среда Эндо Состав : • питательный агар, • лактоза, • основной фуксин. Среда имеет розовый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в темно-красный цвет ; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.
Среда Левина Состав : • питательный агар, • лактоза, • эозин и метиленовый синий. Среда имеет коричневатый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в темно-синий цвет ; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.
Среда Плоскирева Состав : • питательный агар, • лактоза, • нейтральный красный, • соли желчных кислот, бриллиантовый зелёный. Среда имеет розовато-желтоватый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в бруснично-красный цвет ; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.
Техника посевов • Метод Дригальского : Каплю исследуемого материала вносят в первую чашку Петри и стерильным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) делают такой же посев во второй и третьей чашках. С каждым посевом бактерий на шпателе остается все меньше и, при посеве на третью чашку, бактерии будут распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от друга и будут образовываться изолированные колонии. • Посев петлёй параллельными штрихами
Посев петлёй параллельными штрихами Колония — это видимое изолированное скопление представителей одного вида микроорганизмов, образующееся при размножении одной бактериальной клетки на плотной питательной среде. Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по культуральным признакам.
К мясо-пептонному бульону с содержанием 1 % - ного хлористого натра прибавляют 10 % чистого гуммиарабика в порошке. Его растворяют при нагревании и затем бульон осветляют, как желатину, куриным белком. Проверяют капельку осветленной среды в темном поле на отсутствие гранул. Среда должна быть совершенно чистой и не содержать светящихся зернышек. Если они есть, то просветленный гумми-бульон подвергают центрифугированию для удаления зернышек. Убедившись в полном удалении зернышек, гумми-бульон разливают в ампулы по 0 25 - 0 5 мл; ампулы запаивают и стерилизуют в аппарате Коха или под давлением. Такой бульон хранится годами. [2]
Для приготовления мясо-пептонного бульона к 1 л мясного бульона добавляют 5 - 10 г пептона ( пептон - первый продукт гидролиза белка с высокой молекулярной массой) для повышения калорийности среды и 5 г поваренной соли с целью создания осмотической активности. Среду нагревают до растворения пептона, постоянно помешивая. Удобно использовать индикатор бромтимолблау. В нейтральной среде бромтимолблау бутылочно-зеленый, в кислой - желтый, в щелочной - синий. [3]
К 1 л мясо-пептонного бульона прибавляют 15 г агара в волокнах или порошке, нагревают до полного растворения агара, доводят рН до 7 2 - 7 4, осветляют, фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр н разливают во флаконы или пробирки в количествах, необходимых для испытания, закрывают пробирки ватными пробками и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 2 С ( давление 0 11 МПа) в течение 20 мин. Доводят водой объем до 1 л, ставят на кипящую водяную баню и расплавляют в полученном картофельном отваре 20 г агара; фильтруют через ватный фильтр, добавляют 2 г мела и разливают в пробирки; закрывают пробирки ватными пробками н стерилизуют при избыточном давлении 0 05 МПа в течение 30 мин. [4]
К 1 л мясо-пептонного бульона добавляют 12 5 г маннита и 6 мл 1 % - ного раствора нейтральрота. Среду разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при 0 5 атм в течение 30 мин. Среда имеет вишневый цвет, при развитии кишечной палочки становится оранжевой и в поплавке скапливается газ. [5]
К 1 л мясо-пептонного бульона добавляют мелко нарезанную желатину в количестве 100 - 150 г, дают ей набухнуть ( 5 - 10 мин) и нагревают на водяной бане до растворения. Количество требуемой желатины, вводимое в среду, зависит от температуры помещения, где ведется работа. Температура плавления 10 % - ной желатины равна 24 С, 15 % - ной - 25 С. Летом следует добавлять 15 % желатины. По охлаждении до 50 С к МПЖ добавляют взбитый белок и нагревают в кипятильнике Коха 30 мин. Горячую среду фильтруют через бумажный или ватный фильтр, проверяют рН, разливают по пробиркам и стерилизуют при 110 С 15 мин в автоклаве или 3 дня в аппарате Коха по 30 мин. По окончании стерилизации посуду с желатиновыми средами охлаждают водой. Хранить среду рекомендуется в прохладном месте. [6]
К 1 л мясо-пептонного бульон ; прибавляют 15 г агара в волокнах или порошке, нагревают до пол ного растворения агара, доводят рН до 7 2 - 7 4, осветляют, фильт руют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр н разливают вс флаконы или пробирки в количествах, необходимых для испытания закрывают пробирки ватными пробками и стерилизуют в автоклав. С ( давление 0 11 МПа) в течение 20 мин Картофельный агар. Доводят водой объем до 1 л, ставя на кипящую водяную баню и расплавляют в полученном картофель иом отваре 20 г агара; фильтруют через ватный фильтр, добавляю 2 г мела и разливают в пробирки; закрывают пробирки ватным пробками н стерилизуют при избыточном давлении 0 05 МПа в те чение 30 мин. [7]
Для оживления культуры используют мясо-пептонный бульон ( МПБ), который разливают в конические колбы объемом 750 - 1000 мл в количестве 75 - 100 мл. Колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре 120 С в течение-30 мин, затем выдерживают в термостате при температуре 37 0 5 С в течение суток. [8]
Для оживления культуры используют мясо-пептонный бульон ( МПБ), который разливают в конические колбы объемом 750 - 1000 мл в количестве 75 - 100 мл. Колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре 120 С в течение-30 мин, затем выдерживают в термостате при температуре 37 0 5 С в течение суток. [9]
Аэробные протеолитические бактерии учитывают на мясо-пептонном бульоне ( среда 6) по накоплению газа в поплавках. Посевы выдерживают при 28 С в течение двух недель. [11]
В литровую колбу наливают 400 мл мясо-пептонного бульона ( МПБ) и через ватную пробку пропускают до дна стеклянную трубку, наружный конец которой заканчивается резиновым шлангом. После стерилизации колбу подсоединяют к пробнику воздуховода и открывают вентиль пробника. Воздух, барботируя через МПБ, свободно выходит из колбы через ватную пробку. [12]
При определении его антимикробной активности на мясо-пептонном бульоне / рН 7 4 / с Щ о лошадиной сыворотки наибольшее задерживающее рост стафилококка разведение оказалось I: 40000, бактерицидное - 1: 20000, т.е. соответственно в 16 5 и 8 раз ниже, чей в безбелковой среде. В ориентировочной опыте изучена токсичность этого вещества. Оно было введено в подогретом растворе стерильного персикового пасла подкожно белын иышаи. [13]
Метод с использованием в качестве питательной среды глюкозного мясо-пептонного бульона не обладает достаточной специфичностью в отношении санитарно-показа-тельных БГКП. [15]
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)
Nutrient media. Meat-pepton broth (for veterinary). Specifications*
* Наименование стандарта. Измененная редакция, Изм. N 1.
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. N 899 срок действия установлен с 01.01.1976 г. до 01.01.1981 г.*
* Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС N 4, 1994 год). - Примечание изготовителя базы данных.
ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 1975 г.
Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 11, 1989 год
Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Мясопептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующим технологическим регламентом из мясной воды по ГОСТ 20729-75 с добавлением 1% пептона и 0,5% хлорида натрия в разведениях 1:1, 1:2 и 1:4.
1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Норма для разведений
Специфический, свежего мясного экстракта и пептона
Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка
Массовая доля общего азота, %, не менее
Массовая доля азота, аминогрупп, аминокислот и низших пептидов, %, не менее
Массовая доля пептонов, %, не менее
Массовая доля сухого вещества, %, не менее
Массовая доля белка, %, не более
Массовая доля хлористого натрия, %
Концентрация водородных ионов (рН)
Посев на питательные среды не должен давать роста микрофлоры в течение 3 сут в термостате при 37-38 °С
Способность поддерживать рост микробов, оптическая плотность, не менее, для
Staphylococcus aureus "Лоссманов"
Escherichia coli штамм 675
Streptococcus faecalis штамм 6783
1.1, 1.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.
2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.
2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л - 0,6 л.
Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.
2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.
2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
3.1. Методы отбора проб
3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.
Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 см. Пять флаконов используют для анализа, а пять - оставляют в архиве государственного контролера.
Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.
3.3. Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически.
3.4. Определение содержания общего азота
3.4.1. Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
колбу Кьельдаля вместимостью 50-100 см по ГОСТ 25336-82;
элемент нагрева (плитку, горелку);
пипетки на 1, 2, 5 см по ГОСТ 20292-74;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
кислоту серную по ГОСТ 4204-77, концентрированную и 0,1 н раствор;
перекись водорода по ГОСТ 10929-76;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67;
метиловый оранжевый, 0,1%-ный раствор.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.4.2. Проведение испытания
Мясо-пептонный бульон в количестве 1 см помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 см концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора - перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 см через каждые 15-20 мин до полного обесцвечивания раствора.
После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10-12 см дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.
В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 см 0,1 н раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 см 96%-ного этилового спирта.
Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30-33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 см раствора.
Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации берут 1 см дистиллированной воды.
3.4.3. Обработка результатов
Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле
,
где - количество 0,1 н раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, см;
- поправочный коэффициент к титру 0,1 н серной кислоты;
- количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, см;
или через полотно. Полученную мясную воду стерилизуют при 120° в течение 20 мин.
Печеночная вода. Свежую печень крупного рогатого скота освобождают от жира, канальцев,
пленок и пропускают через мясорубку. 500 г фарша заливают 1 л водопроводной воды, настаивают в
течение 1 часа и кипятят при помешивании в течение 3 минут. После отстаивания фарш удаляют, а
жидкость доливают дистиллированной водой до первоначального объема и фильтруют через ватно-
марлевый фильтр. Разливают по колбам, стерилизуют при 112° (0,5 атм.) в течение 30 - 40 минут.
Мясо-пептонный печеночно-глюкозно-глицериновый агар (МППГГА). К 610 мл мясной воды
добавляют 305 мл печеночной воды, 10 г пептона, 5 г х.ч. хлорида натрия и 20 - 30 г агар-агара,
предварительно промытого и хорошо отжатого. Смесь варят в течение 1 часа в автоклаве, фильтруют
через нейлоновый или ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН 7,2, добавляют 10 г глюкозы и 20
мл глицерина. Среду разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при 110° (0,4 атм.) в течение
30 минут. рН среды до стерилизации - 7,3 - 7,4, после стерилизации - 6,8 - 7,0.
Мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ) готовят аналогично МППГГА, но без добавления
агар-агара, глюкозы и глицерина.
Печеночно-глюкозно-глицериновый агар (ПГГА). К печеночной воде добавляют 1% пептона,
0,5% х.ч. хлорида натрия и 2 - 3% агар-агара, предварительно промытого и хорошо отжатого. Смесь
варят в течение 1 часа в автоклаве, фильтруют через нейлоновый или ватный фильтр, устанавливают
рН 7,0 - 7,2, добавляют 1% глюкозы и 2 - 3% глицерина. Среду разливают в пробирки или колбы и
стерилизуют при 110° (0,4 атм.) в течение 30 минут.
Печеночно-глюкозно-глицериновый бульон готовят аналогично ПГГА, но без добавления агар-
Картофельный агар. 500 г очищенного картофеля (берут белые или желтые клубни средней
величины), нарезанного ломтиками, варят в 1 л водопроводной воды до готовности (избегать
сильного разваривания картофеля). Затем отвар фильтруют через ватный фильтр и дистиллированной
водой доводят объем до первоначального (1 л). К фильтрату добавляют 1% пептона, 0,5% х.ч.
хлорида натрия и 2 - 3% агар-агара. Смесь варят до полного расплавления агара, устанавливают рН
7,2 и отстаивают в теплом месте. В застывшем агаре срезают нижний слой с осадком, а прозрачную
часть агара расплавляют и фильтруют через ватный фильтр. Вновь устанавливают рН 7,2, добавляют
1% глюкозы, и 3% глицерина, разливают по пробиркам или колбам и стерилизуют при 115° (0,7 атм.)
в течение 20 - 30 минут. После стерилизации рН среды 6,8.
Сывороточно-декстрозный агар. К 835 мл дистиллированной воды добавляют 20 г агар-агара,
10 г пептона, 5 г х.ч. хлорида натрия и 165 мл мясной воды. Смешивают, кипятят до расплавления
агара, устанавливают рН 7,8. Затем стерилизуют текучим паром в течение 1 часа, после чего пар
закрывают, давление доводят до 2 атм. и нагреватель выключают. После автоклавирования среду
отстаивают в течение 1 часа, затем фильтруют через ватный или бумажный фильтр, доводят рН до
7,4, разливают в колбы, учитывая объем среды, и стерилизуют при 115° (0,7 атм.) в течение 15 минут.
Перед употреблением среду расплавляют, охлаждают до 50° и добавляют к ней нормальную
сыворотку крови крупного рогатого скота или лошади и раствор декстрозы, профильтрованные через
фильтр Зейтца. Конечная концентрация сыворотки в среде должна быть 10%, декстрозы - 1%.
Плотный печеночно-сывороточный и печеночно-аминопептидный агар. К 1000 мл печеночной
воды добавляют 10 г пептона, 5 г х.ч. хлорида натрия, 20 г агар-агара. К полученной смеси добавляют
17 мл 10-процентного раствора двууглекислой соды и автоклавируют при 115° (0,7 атм.) в течение 20
- 25 минут, фильтруют через ватный фильтр, устанавливают рН 7,0 - 7,2 и добавляют 10 г глюкозы и
20 мл глицерина. Разливают в колбы и стерилизуют при 110° (0,4 атм.) в течение 20 минут. Хранят в
прохладных условиях. Перед употреблением смесь расплавляют, охлаждают до 50° и добавляют 10 -
20% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота (овец) или 10 - 15% аминопептида, затем
разливают в пробирки или бактериологические чашки.
Полужидкий печеночно-сывороточный и печеночно-аминопептидный агар. Берут мясной
печеночной воды по 500 мл, добавляют 10 г пептона, 5 г х.ч. хлорида натрия, 1,5 - 2 г агар-агара.
Устанавливают рН 7,0 - 7,2. Смесь кипятят, разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 115°
(0,7 атм.) в течение 30 минут. Хранят на холоде. Перед употреблением добавляют стерильную
сыворотку крови крупного рогатого скота или овец или аминопептид из расчета 10% к объему среды
и разливают в пробирки.
Эритрит агар. Представляет собой готовую питательную среду для выделения бруцелл.
Читайте также: